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上海熒光免疫組化技術

來源: 發布時間:2021-09-07

常用染色方法

根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯

免疫組化染色(IHC)

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從實驗結果而言,免疫組化技術服務主要涉及抗體實驗結果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關數據的提供,上述工作是免疫組化工作的重點內容,只有嚴格的實驗設計,標準的實驗操作,專業化的結果分析才能更好的滿足客戶的要求,這點對于形式為腹水,上清,培養液之類的抗體顯得更為重要。關于上述服務內容應該在實驗開始前由雙方明確,一般而言,客戶方實驗前應提出需要什么樣的結果與分析,例如是簡要還是詳細的描述實驗結果,需要實驗數據否,圖片的數量與規格等。如果為雙盲試驗或有第三方參與,則事先申明。


免疫組化病理實驗融享生物的優勢:高效率,性價比高,為病理實驗提供有效保障。上海熒光免疫組化技術

    非特異性染色彌散性均勻)2.組織切片制作過程的影響①固定不良—非特異性染色,顯示不均。②邊緣干燥—非特異性染色(常見),加抗體時勿干片。3.人工假象與特異性結果顯示不在同一平面上。陽性對照:用已知抗原陽性的切片與待檢標本同時進行免疫細胞化學染色。對照切片呈陽性結果,標為陽性對照。陰性對照:用確證不含已知抗原的標本作對照,應呈陰性結果,稱陰性對照。其實這只是陰性對照中的一種,陰性對照還應包括空白、替代、吸收和***實驗。▲染色失敗的幾種原因:(1)所染的全部切片均為陰性結果,包括陽性對照在內。全部(-)原因可能:①染色未完全嚴格按照操作步驟進行;②漏加一種抗體,或抗體失效;③緩沖液內含疊氮化鈉,***了酶的活性;④底物中所加H2O2量少或失效;⑤復染或脫水劑使用不當(2)所有切片均呈陽性反應,原因可能是:①切片在染色過程中抗體過濃,或干燥了。②緩沖液配置中未加氯化鈉和PH值不準確,洗滌不徹底。③使用已變色的呈色底物溶液,或呈色反應時間過長。④抗體溫育的時間過長。⑤H2O2濃度過高,呈色速度過快。粘附劑太厚。(3)所有切片背景過深,原因可能是:①未加酶消化處理切片。②切片或涂片過厚。③漂洗不夠。上海熒光免疫組化技術免疫組化等病理實驗服務找融享生物 。

根據標記物的不同,免疫細胞化學技術可分為免疫熒光細胞化學技術,免疫酶細胞化學技術,免疫鐵蛋白技術,免疫金-銀細胞化學技術,親和免疫細胞化學技術,免疫電子顯微鏡技術等。近些年來,核酸分子原位雜交技術采用生物素、地高辛等非放射性物質標記探針,和免疫細胞化學技術密切結合,發展為雜交免疫細胞化學技術。不同的免疫細胞化學技術,各具有獨特的試劑和方法,但其基本技術方法是相似的,都包括抗休的制備,組織材料的處理、免疫染色、對照試驗、顯微鏡觀察等步驟。還有雙重和多重標記技術也有重要的用途。

免疫組化技術是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結合的特點,通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察,從而在抗原抗體結合部位確定組織細胞結構的一門組化技術。在病理診斷、基礎醫學研究工作中免疫組化技術已成為非常重要的手段。免疫組化顯色是一種酶促反應,它通過連結在抗原抗體復合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發生反應,生成有色的復合物沉淀在組織細胞中的抗原部位。由于標本組織來源不同,細胞分化不一,抗原含量不等,顯色反應所需時間不可能完全一致。整個免疫組化過程步驟較多,每步應按操作要求嚴格操作,脫蠟一定要充分。每步PBS沖洗時間、次數一定不能省略,因PBS液內含有鹽,有關免疫組化,HE染色,免疫熒光服務就找融享生物。

    (1)ABC復合物的制備:(2)ABC法反應原理6.SP或SAP法(過氧化物酶標記的鏈霉卵白素或過氧化物酶標記的堿性磷酸酶染色)Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase)※該法是ABC法基礎上的進一步改良,使卵白素與鏈霉(而非生物素)結合,而后再結合PO。它有4個亞基可與生物素結合,靈敏特異,背景低,成本低。現在還有plus盒。優點是:更簡便,放大倍數↑,等電點中性更適合組織。分子量小,穿透力↑。7.蛋白A—金法(Protein—Agoldmethod)~多用于電鏡8.雙重組化染色法應用雙重免疫組織化學可在同一張切片,同一細胞或亞細胞結構內同時顯示兩種不同的抗原。9.免疫金—銀染色法(Immunogold—silverstainingIGSS)固定——見前述注意事項:1.固定劑的選擇:因組織而不同,注意質量和性能。2.固定方式的選擇:①浸漬固定(參考文獻)②灌注固定(+后固定)③蒸汽固定免疫組化染色步驟(以ABC法為例)1.切片脫蠟入水,入PBS洗三次/15分鐘。2.封閉內源性過氧化物酶。用新配置的(在PAS或—HCL緩沖液)室溫,30分鐘。3.水洗,入PBS,洗三次,每次5分鐘。4.減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清(產生二次抗體動物血清!),室溫,30分鐘。病理實驗免疫組化專業設備,真實實驗結果。上海熒光免疫組化技術

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