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來源: 發布時間:2023-10-13

Exosome(外泌體)是由活細胞分泌小囊泡,具有典型的脂質雙分子層結構;參與細胞之間的交流,物質的運輸以及正常生理過程的維持,此外還與疾病的產生有關。對分離的外泌體進行體外標記或示蹤,有助于對外泌體的功能進行進一步的研究。目前對于外泌體的標記方法有很多種,包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67,PKH-26具有更長的半衰期,標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內細胞跟蹤研究。外泌體的異質性可以根據其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區分。尿液外泌體提取試劑盒服務

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流式細胞技術針對外泌體的表面抗原標記物進行檢測,能夠實現外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低,所以采用常規的流式細胞儀進行檢測時往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強反射,操作耗時又費力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細胞儀(HSFCM),將可檢測的外泌體粒徑降至40nm,能夠在不連接beads的情況下實現每分鐘10000個外泌體的檢測,并且能夠結合免疫熒光的方法進行外泌體標志蛋白質的定量檢測,目前該儀器已商品化。安徽外泌體融合實驗外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類。

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外泌體不只可作為疾病診斷的生物標志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。外泌體能夠負載的治理物質包括小分子化合物、蛋白質、寡核苷酸等,且在體液中寬泛分布且具有定向歸巢能力。外泌體獨特的生物兼容性、高穩定性、瘤靶向性使其在未來瘤治理中有很大的利用價值。外泌體能夠裝載的治理物質包括小分子化合物、蛋白質、寡核苷酸等。作為小分子化合物載體,外泌體裝載姜黃素、紫杉醇、阿霉素等主要是用于抗瘤研究;已經發現外泌體可遞送多種蛋白質,例如酶,細胞骨架蛋白質和跨膜蛋白質;外泌體作為核酸分子的藥物載體主要用于基因治理,外泌體天然的可以攜帶遺傳(例如miRNA,siRNA)到靶細胞中,從而在生物學和致病過程中誘導遺傳修飾。

Buller等利用miR-146b的質粒轉染間充質干細胞,使其分泌的外泌體負載miR-146b,并將外泌體注射至移植到小鼠體內的GBM處。結果表明,這種利用外泌體運輸miRNA進行zhiliao的方法可以有效抑制中流的生長。對于GBM類腦部中流,體內zhiliao不同于體外細胞實驗,更需考慮腦部組織微環境對藥物的影響,外泌體可運輸miRNA并不破壞其在腦部中流組織處的原本功效。然而,至今還沒有利用外泌體載藥經靜脈注射zhiliaoGBM的報道,這主要是由于跨越血腦屏障(BBB)仍然是外泌體進行腦部中流zhiliao需要解決的難題。盡管如此,Wood等報道的在進行阿茲茨海默病zhiliao時利用對腦部神經元特異性肽RVG靶向的外泌體穿過BBB的研究顯示了經靶向修飾的外泌體具備穿過BBB的潛力,因此外泌體載藥zhiliao具有廣闊的前景。確認外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機制,通過促進或壓制釋放機制。

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外泌體基礎醫學和臨床應用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質組分,并在100000×g~200000×g的轉速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術被認為是外泌體分離的“金標準”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進行超濾來提高產物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉子類型、旋轉半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。外泌體示蹤實驗

外泌體介導的細胞間交流可以改變瘤的生長、細胞遷移、抗病毒等生理過程。尿液外泌體提取試劑盒服務

外泌體(Exosome)介導瘤血管的形成和轉移。外泌體(Exosome)能將自身的細胞因子IL-8和VEGF釋放到細胞外,作用于內皮細胞膜表面受體,導致瘤血管快速形成并較終通過發生EMT過程促進瘤的遷移。瘤細胞來源的外泌體(Exosome)中含有血管生長素、血管內皮生長因子等,這些細胞因子以不同的作用方式促進瘤血管的形成,如VEGF通過喚醒磷酸酯酶C和第二信使的形成,誘導纖維蛋白溶解酶原活化物的表達,使得基底膜降解,從而促進瘤細胞的遷移。尿液外泌體提取試劑盒服務

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