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來源: 發布時間:2022-01-26

實驗優化建立基于免疫磁分離技術對金黃色葡萄球菌的快速分離方法,為后續快速檢測提供基礎.利用金黃色葡萄球菌多抗制備的免疫磁珠對其捕獲.結合平板菌落計數,考察包被磁珠時多抗加入量,免疫磁珠加入量及捕獲時間等因素對捕獲效率的影響.在單因素實驗基礎上進行正交實驗,并對該方法的靈敏度,特異性及其在食品中的應用效果初步探索.結果表明,比較好捕獲條件為抗體加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕獲時間45min,在此條件下捕獲效率均超過30%,該方法捕獲限可達到101CFU/mL,特異性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黃色葡萄球菌的快速分離,捕獲時間小于1h.免疫磁分離作為一種快速的分離篩選方法,可用于食源性金黃色葡萄球菌的快速分離.BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 Cell Nature Science。陜西protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

CoIP :實驗原理
一切從 CoIP 的原理談起:免疫共沉淀是一種以抗體和抗原識別專一性為基礎,用于研究蛋白質相互作用的經典方法。
實驗步驟
第一步:樣品制備
首先進行樣品制備,以提取出想要研究的蛋白,由于不同類型的細胞裂解條件有所差異,這里不展開介紹。
注意事項:
細胞裂解要采用溫和的裂解條件,避免破壞細胞內存在的蛋白間相互作用,裂解、洗滌時需使用非變性裂解液,如 NP-40 和 Triton X-100。
此外,由于不同細胞裂解條件不一樣,建議通過預實驗來確定比較好條件。
第二步:固定抗體
在共沉淀之前,先將固相基質與抗體共同孵育,從而使兩者結合,常用的固相基質有瓊脂糖 Agarose 和磁珠 Magnetic beads。
瓊脂糖 Agarose 具有簡單易用,直徑大,結合力強,多孔易吸附的特點;磁珠具有直徑小,背景低,抗體消耗少的特點,但操作時需借助磁力架。
注意事項:
抗體的選擇十分重要,選經過 IP 驗證的抗體,可以減少假陽性概率。
同時,要注意抗體/緩沖液的比例,抗體稀釋過度不利于后續抗原抗體結合;而抗體過多就不能完全沉降在固相基質上,殘存于上清。
操作時,為了避免損傷 beads,使用大口徑或截短***頭進行加樣。
湖北protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠經銷商價格4折起BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠蛋白相互作用。

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達79%.應用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經鑒定與其他抗原表位無反應性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應用前景.

BEENbio鏈霉親和素磁珠本產品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價偶聯而成。這種微球能用于捕獲生物素標記的底物,如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結合是***的非共價生物交互作用之一,因此,這也是親和層析法所使用的一種強大工具。生物分子可以與生物素輕松融合,而層析基質上固定的鏈霉親和素配體可以與之結合,而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性,捕獲所需的底物能夠直接應用于后續實驗。本產品可廣泛應用于免疫學檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細胞分選等分子生物學實驗。BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

骨髓間充質干細胞在一定條件下可分化成為多種結締組織細胞,也可分化成神經系統的神經元和神經膠質細胞.目的:觀察采用免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經干細胞的生物學特征.設計,時間及地點:以患者自身骨髓組織為觀察對象的實驗,于2003-03/2007-06在菏澤市立醫院檢驗科完成.材料:骨髓組織來自菏澤市立醫院神經內科住院的中風,老年性癡呆,帕金森病,腦缺血等神經系統疾病患者.方法:利用免疫磁珠表面的特異性抗體與骨髓組織中神經干細胞抗原相結合,在磁場作用下使結合磁珠與其他細胞分離,從而獲得神經干細胞,再將所分離的純化神經干細胞接種到含體積分數為0.20胎牛血清的EaglesMEM培養液,再在培養基中加入堿性成纖維因子和表皮生長因子進行原代培養.主要觀察指標:采用免疫組織化學染色與免疫熒光染色鑒定細胞,并采用流式細胞術測定細胞DNA含量.結果:在相差顯微鏡下觀察培養的神經干細胞,細胞形態豐滿,胞核及核仁清晰可見,神經突起粗大,網絡稠密.免疫組織化學和免疫熒光染色顯示,細胞神經元特異性烯醇化酶,神經蛋白,膠質纖維酸性蛋白酶,微管相關蛋白為陽性.傳代后的細胞用流式細胞術測定DNA含量為正常二倍體,無誘發突變.應用免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1陽性細胞。安徽protein A/G COIP免疫磁珠批量定制

多聚抗原肽免疫磁珠在制備單表位抗體中的應用。陜西protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

COIP常見問題及對策

1:如何提高抗體與磁珠結合效率?

磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關,請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低,可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間( 30~120min)、提高結合緩沖液的pH值(8~9)及降低離子強度( 25~100mM NaCl)等方法提高親和效率。

2:如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?

可以先將抗體與樣品進行孵育,形成抗體-抗原復合物,再用 Protein A/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效 率,并降低磁珠與樣品接觸的時間,從而提高沉淀產物的特異性。對 于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。 陜西protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

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