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遼寧protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應商

來源: 發布時間:2022-02-17

免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB)技術是20世紀80年代出現的技術方法。以免疫學為基礎,滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學等各個領域,其在免疫檢測、細胞分離、生物大分子純化和分子生物學等方面有著越來越***的使用。免疫磁珠的結構:磁珠是由**金屬顆粒(Fe2O3,Fe3O4),**外層包裹的高分子材料(如聚苯乙烯、聚氯乙烯)和**外層的功能配基(如-NH2,-COOH、-OH、-CHO)組成。免疫磁珠在生物醫學領域的應用:1.細胞分選,2.蛋白質/抗體分離與純化。3.核酸分離純化核酸結合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。4.免疫檢測免疫磁珠由于粒徑小,比表面積大,可捕獲較多的待測物,并直接在其表面進行酶顯色、熒光或同位素顯示,從而建立了一系列檢測速度快、特異性高、靈敏度高和重復性好的免疫檢測方法。納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。遼寧protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應商

免疫磁珠(Immunomagneticbeads,IMB),是由載體微球和免疫配基結合而成的一種納米級材料.免疫磁珠分離技術是以高均一性的磁性微球為固相支持物,將免疫配基(如抗體,抗原等)通過功能基團結合到磁性載體上形成免疫磁性微球,利用特異性的免疫學反應,在磁力作用下,發生力學移動,從混合溶液中分離出特異性的靶物質.具有分離速度快,效率高,可重復性好,操作簡單,不需要昂貴的儀器設備等優點.本實驗采用化學共沉淀的方法合成了納米級Fe3O4磁性微粒,具有顆粒均一程度高,懸浮穩定性好,超順磁性等特點,經固體物含量的測定及其粒徑的測定,磁珠的濃度約為7.9mg/mL,粒徑約為30~100nm左右,對其懸浮液加入烷基化試劑和醛基化試劑進行表面修飾,提高了磁性微粒的性能.安徽anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應商空腸彎曲菌免疫磁珠富集方法的建立。

建立有效的人類神經干細胞分離純化系統和方法.方法:無菌取孕24周流產胎兒的室下區腦組織,制備細胞懸液,用磁性微珠標記的CD133單克隆抗體與細胞孵育,通過磁分選器分離出CD133(+)和CD133(-)細胞,通過體外培養并誘導分化,觀察CD133陽性細胞和陰性細胞的增殖情況及分化能力.結果:經免疫磁珠分選的室下區腦組織中,CD133(+)細胞占胚胎腦組織細胞的2%左右,該細胞體外擴增能力強,細胞呈球形生長,并易聚集成團,培養5d,10d,15d,20d進行活細胞計數,細胞增長率分別為1.79%,4.82%,7.21%,14.66%,誘導分化后的細胞經染色鑒定可分化為神經元,神經膠質等多種神經細胞,陰性細胞擴增能力弱,活細胞計數以死細胞數量居多,大約705,另外一些細胞貼壁分化.結論:免疫磁珠法簡便,有效,經免疫磁珠分離的神經干細胞在體外能進一步培養擴增并分化.

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達79%.應用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經鑒定與其他抗原表位無反應性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應用前景.免疫磁珠技術應用于肺Cancer中的研究進展。

分離轉基因小鼠骨髓造血干細胞.運用針對小鼠干細胞表面特異表達的干細胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細胞,用流式細胞術(FACS)檢測MACS分離后骨髓細胞中干細胞(Sca-1陽性細胞)比例,監測細胞分選效果.結果顯示MACS分離后骨髓細胞中Sca-1陽性細胞所占比例達85%以上,涂片觀察發現細胞組成和細胞形態學特征與FACS所得結果一致.MACS可以從轉基因小鼠全骨髓細胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細胞,細胞純度可達85%以上.免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細胞及其生物學特性鑒定。吉林protein A/G COIP免疫磁珠送貨上門

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COIP實驗步驟
第三步:免疫共沉淀
根據不同的抗體結合方式,這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同,但是本質是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復合物。
如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads,先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。
如果使用了交聯劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結合,以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步:洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當蛋白或抗體對低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項:
如后續需進行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。
對于交聯劑結合的 beads,為了保持抗體偶聯樹脂的活性,應立即再生和存儲樹脂,保證抗體可以重復利用。
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