COIP常見問題及對策

1：如何提高抗體與磁珠結合效率?

磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關，請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（ 30～120min）、提高結合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。

2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?

可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產物的特異性。對 于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。 納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。河南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經分離培養獲得大量,高純度雪旺細胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側坐骨神經,解剖鏡下剝離去除神經外膜,獲得神經束,將神經束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養液培養.7d后應用免疫磁珠法對細胞進行純化培養,培養2d后進行傳代接種.培養過程中對細胞進行形態學觀察,計數及活力測定;MTY法繪制細胞生長曲線,采用免疫細胞化學熒光染色對細胞進行鑒定并且計算所得細胞純度.[結果]分離培養所得細胞即為雪旺細胞;采用免疫磁珠法能對培養所得雪旺細胞進行純化.純化后雪旺細胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養2d后就可以傳代.[結論]免疫磁珠法可以用于雪旺細胞的純化培養,所得雪旺細胞純度高,活力強,能滿足組織工程人工神經的需要.甘肅COIP免疫磁珠經銷商價格4折起免疫磁珠技術應用于肺Cancer中的研究進展。

常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國外的有Dynal、Qiagen等，國內將磁珠應用于核酸提取的研究起源于02年左右，經過近些年的反復試驗，形成了穩定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾病（如乙肝、丙肝、結核菌）等的定量檢測（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國產磁珠法試劑盒與進口產品相比，已不單單是只具有價格優勢，其產品的穩定性、高效性、提取出的核酸的質量與產量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產試劑盒的推廣是一大挑戰。

    免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細胞,獲得同質性骨髓基質干細胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學修復重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻髓者骨髓,淋巴細胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細胞,研究其生長曲線,體外擴增能力,集落形成能力,細胞表型,細胞周期,成骨能力.結果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細胞.經體外培養發現STRO-1^+細胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細胞呈成纖維細胞梭形外觀.②生長曲線可分為細胞生長延滯期,對數生長期及穩定期,細胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細胞可以在體外擴增12周左右,形成的成纖維細胞集落數,處于細胞分裂期的細胞數,擴增倍數均低于傳統分離方法得到的骨髓基質干細胞.④經流式細胞儀檢測,STRO-1^+細胞穩定地表達CD29,CD44,CD105,不表達造血細胞系的表面標記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經成骨培養發現STRO-1^+的骨髓基質干細胞具有很強的成骨分化能力.結論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質干細胞,且具有高效,靈敏。BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

常見問題及對策

3： 如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現的聚集情況？

磁珠應保存在2～8℃，使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚 集，或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發生聚集屬 于正常現象，不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、 Tween-20 或 Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。經過低pH洗脫操 作的磁珠可以用結合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1% (v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴 處理2min，即可使磁珠恢復均勻狀態，以上處理均不影響磁珠的抗體 結合效率。

4： 如何解決磁珠易粘附管壁的現象？

建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加 0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或 Triton X-100）可以有效降低磁珠對耗材的粘附。

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免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經干細胞的生物學特征。河南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

精原干細胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進行基因修飾新方法等研究的前提基礎。采用免疫磁珠分選法,使用干細胞抗體CD90.2進行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細胞分析法和定量PCR驗證了磁珠分選效率。流式細胞分析結果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測結果:磁珠分選后支持細胞特異表達基因GATA4***下調(6倍)、SSCs表達基因GFRα-1上調(6.5倍)、生殖干細胞特異表達基因OCT4極***上調(5.9倍),3個基因相對表達量的變化說明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細胞分析法所產生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉基因熒光的影響。河南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

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