常見問題及對策

5： 磁珠在使用過程中出現結塊現象？

磁珠在使用時如果出現結塊現象一般較難振蕩打散，容易導致分 布不均，出現該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的 結合在一起。用超聲波水浴處理 2min 即可打散磁珠使其重新分散， 但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

緩沖液匯總

Co-IP & CHIP磁珠緩沖液匯總：

細胞裂解液：正常RIPA 細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)

抗體磁珠結合buffer：PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

抗原與抗體/磁珠復合物binding buffer：可以用RIPA 細胞裂解緩沖液代替

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

6、Elution buffer: (1)變性洗脫緩沖液，直接加入1*蛋白loading buffer, 98^oC 5 min后棄去磁珠后，收集上清液檢測。（2）非變性洗脫緩沖液：Elution buffer: 0.1 M -0.2 M Glycine, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 2.5-3.1。

    免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細胞,獲得同質性骨髓基質干細胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學修復重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻髓者骨髓,淋巴細胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細胞,研究其生長曲線,體外擴增能力,集落形成能力,細胞表型,細胞周期,成骨能力.結果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細胞.經體外培養發現STRO-1^+細胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細胞呈成纖維細胞梭形外觀.②生長曲線可分為細胞生長延滯期,對數生長期及穩定期,細胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細胞可以在體外擴增12周左右,形成的成纖維細胞集落數,處于細胞分裂期的細胞數,擴增倍數均低于傳統分離方法得到的骨髓基質干細胞.④經流式細胞儀檢測,STRO-1^+細胞穩定地表達CD29,CD44,CD105,不表達造血細胞系的表面標記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經成骨培養發現STRO-1^+的骨髓基質干細胞具有很強的成骨分化能力.結論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質干細胞,且具有高效,靈敏。吉林protein A/G COIP免疫磁珠供應商多聚抗原肽免疫磁珠在制備單表位抗體中的應用。

建立有效的人類神經干細胞分離純化系統和方法.方法:無菌取孕24周流產胎兒的室下區腦組織,制備細胞懸液,用磁性微珠標記的CD133單克隆抗體與細胞孵育,通過磁分選器分離出CD133(+)和CD133(-)細胞,通過體外培養并誘導分化,觀察CD133陽性細胞和陰性細胞的增殖情況及分化能力.結果:經免疫磁珠分選的室下區腦組織中,CD133(+)細胞占胚胎腦組織細胞的2%左右,該細胞體外擴增能力強,細胞呈球形生長,并易聚集成團,培養5d,10d,15d,20d進行活細胞計數,細胞增長率分別為1.79%,4.82%,7.21%,14.66%,誘導分化后的細胞經染色鑒定可分化為神經元,神經膠質等多種神經細胞,陰性細胞擴增能力弱,活細胞計數以死細胞數量居多,大約705,另外一些細胞貼壁分化.結論:免疫磁珠法簡便,有效,經免疫磁珠分離的神經干細胞在體外能進一步培養擴增并分化.

Anti Flag COIP磁珠

產品價格

產品描述

BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價結合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體，與傳統的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較，抗體結合能力相同，背景更低，由于采用磁性分離，使得每次COIP可以節省40%的時間。

產品特性

儲存條件

4^oC長期穩定，

使用說明

磁珠的準備

重懸Anti Flag 免疫磁珠，取10 μL加入到500 μL TBS，洗滌3次，分離磁珠，棄上清。

樣品的結合（binding）

在上述沉淀中加入500 μL細胞裂解液，室溫緩慢孵育2小時或者4°C條件下過夜，分離磁珠，棄上清。

結合過程中，磁珠可能會出現聚團或呈片狀，屬于正常現象，不會影響實驗結果。

洗滌（washing）：0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次，每次5min，分離磁珠，棄上清。

洗脫（elution）:上述所得沉淀中加 入50 μL 1×蛋白上樣緩沖液，煮沸5 min，冷卻后分離磁珠，吸取上清液，進行SDS-PAGE檢測。 紅細胞膜免疫磁珠檢測成分血中抗A/抗B的研究。

免疫磁珠分離法純化抗血清的實驗條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價高達1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結合10 min達到平衡,其比較大結合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應所需時間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.CD3/CD28免疫磁珠法體外擴增外周血T淋巴細胞。天津COIP免疫磁珠代理價格4折起

免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細胞及其生物學特性鑒定。吉林anti-Flag COIP免疫磁珠經銷商價格4折起

磁珠分離細胞STRO-1+的DPSC、EMSC中HNK-1、Nestin的表達,進一步了解DPSC的表型特點及與EMSC的相關性,為今后研究提供較為純化的細胞來源。方法采用間接免疫磁珠分離法獲得DPSC、EMSC,間接免疫熒光雙標法檢測抗原HNK-1、Nestin的表達。結果磁珠分離前后進行細胞計數,大約有5%的DPSC為STRO-1+的細胞,大約有1%的EMSC為STRO-1+的細胞;STRO-1+的DPSC免疫熒光檢測同時表達HNK-1(++)、Nestin(+),STRO-1+的EMSC免疫熒光檢測顯示也同時表達HNK-1(++)、Nestin(++)。結論免疫磁珠分離法獲得STRO-1+陽性的DPSC共表達EMSC的標記HNK-1和Nestin,進一步說明二者作為間充質來源的干細胞,細胞表型具有繼承性。吉林anti-Flag COIP免疫磁珠經銷商價格4折起

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