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來源: 發布時間:2022-03-04

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細胞的簡易實用方法,通過造血祖細胞集落培養分析其在細胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進的MACS富集,分離臍血CD34+細胞,以甲纖半固體造血細胞培養法觀察其粒-單系細胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數量和特性.結果:臍血分離前,CD34+細胞純度為1.5%~3%,MACS分離后其純度可達85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達91%;CD34+造血祖細胞培養有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細胞因子組合擴增培養9~14d,CD34+細胞在液體培養中有明顯擴增,MACS分離后CD34+細胞總數增加39倍,羥基淀粉沉淀和MACS分離可增加45倍.結論:應用羥基淀粉沉淀和改進的MACS系統可有效富集,分離臍血CD34+細胞,羥基淀粉沉淀對CD34+細胞的富集,分離無影響;臍血細胞分離后作造血祖細胞培養,可產生豐富的CFU-GM和BFU-E,說明羥基淀粉沉淀分離的CD34+細胞的增殖功能優于MACS分離CD34+細胞的增殖功能.免疫磁珠負性富集結合免疫熒光抗體技術檢測卵巢Cancer患者外周血CTCs的方法建立和應用。黑龍江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

免疫磁珠技術(immunomagneticbeads,IMB)是近年來國內外研究的一種新的免疫學技術.隨著納米技術的不斷發展,納米免疫磁珠具備了良好的磁感應性,超順磁性,高特異性,高濃縮性,高分離率,且不影響細胞活性等優點,因此它能從大量外周血細胞中篩選出帶有特異性制備可高效,特異地分離單增李斯特菌的免疫磁珠.探討羧基修飾磁珠與多克隆抗體的不同偶聯條件和免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.方法:以單增李斯特菌作為抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔源多克隆抗體,鑒定其與單增李斯特菌體的結合能力;選擇6種不同的偶聯緩沖溶液,設置了6個主要偶聯時間和6組偶聯溫度,通過比較磁珠與抗體偶聯后上清中剩余的抗體量來確定比較好偶聯條件.結果:制備的多克隆抗體效價為1.3×105,該抗體與單增李斯特菌體有較好的結合,抗體與1mg羧基修飾磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水嗎啉乙磺酸緩沖溶液(MES)中,37℃偶聯2h,偶聯抗體的量為160μg;制得的免疫磁珠的捕獲率可達77.0%.結論:獲得羧基磁珠與抗體偶聯的比較好條件,該免疫磁珠用于食品中單增李斯特菌的檢測,與常規的平皿增菌培養顯色法比較,檢測時間至少縮短20h.標記的腫瘤細胞湖南anti-HA COIP免疫磁珠批量定制BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠 Cell Nature Science。

磁珠與抗體偶聯的比較好條件,制備抗單增李斯特菌免疫磁珠;將免疫磁珠與顯色培養法結合,初步建立起利用免疫磁珠分離技術對單增李斯特菌進行分離鑒定的檢測方法.從而為食品中單增李斯特菌的檢測提供一種快速,高效和靈敏的檢測新方法.方法:以單增李斯特菌體作為免疫抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔抗單增李斯特菌多克隆抗體,鑒定多抗活性以及與單增李斯特菌體的結合能力;用激光粒度儀和透射電鏡分析不同活性基團修飾磁珠的粒徑大小和分散性,選擇性質穩定的磁珠用以制備免疫磁珠;設計正交試驗,摸索pH,溫度,時間對氨基修飾磁珠與多抗偶聯的影響,選擇比較好條件制備免疫磁珠并用于捕獲單增李斯特菌;設計不同的偶聯緩沖溶液,偶聯時間,偶聯溫度,通過比較羧基修飾磁珠與抗體偶聯后上清中剩余的抗體量來確定比較好偶聯條件,運用制備的免疫磁珠對樣品中的單增李斯特菌進行捕獲,并與顯色平板結合試驗,鑒定制備的免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.

分離轉基因小鼠骨髓造血干細胞.運用針對小鼠干細胞表面特異表達的干細胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細胞,用流式細胞術(FACS)檢測MACS分離后骨髓細胞中干細胞(Sca-1陽性細胞)比例,監測細胞分選效果.結果顯示MACS分離后骨髓細胞中Sca-1陽性細胞所占比例達85%以上,涂片觀察發現細胞組成和細胞形態學特征與FACS所得結果一致.MACS可以從轉基因小鼠全骨髓細胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細胞,細胞純度可達85%以上.外周血微轉移前列腺Cancer細胞的免疫磁珠法檢測。

免疫共沉淀(COIP)優點

(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態;

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。

免疫共沉淀(COIP)缺點

(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;

(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇***檢測的抗體,所以,若預測不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。

(4)靈敏度沒有親和色譜高。 BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。遼寧anti-Myc COIP免疫磁珠代理價格4折起

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精原干細胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進行基因修飾新方法等研究的前提基礎。采用免疫磁珠分選法,使用干細胞抗體CD90.2進行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細胞分析法和定量PCR驗證了磁珠分選效率。流式細胞分析結果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測結果:磁珠分選后支持細胞特異表達基因GATA4***下調(6倍)、SSCs表達基因GFRα-1上調(6.5倍)、生殖干細胞特異表達基因OCT4極***上調(5.9倍),3個基因相對表達量的變化說明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細胞分析法所產生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉基因熒光的影響。黑龍江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

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