骨髓間充質干細胞在一定條件下可分化成為多種結締組織細胞,也可分化成神經系統的神經元和神經膠質細胞.目的:觀察采用免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經干細胞的生物學特征.設計,時間及地點:以患者自身骨髓組織為觀察對象的實驗,于2003-03/2007-06在菏澤市立醫院檢驗科完成.材料:骨髓組織來自菏澤市立醫院神經內科住院的中風,老年性癡呆,帕金森病,腦缺血等神經系統疾病患者.方法:利用免疫磁珠表面的特異性抗體與骨髓組織中神經干細胞抗原相結合,在磁場作用下使結合磁珠與其他細胞分離,從而獲得神經干細胞,再將所分離的純化神經干細胞接種到含體積分數為0.20胎牛血清的EaglesMEM培養液,再在培養基中加入堿性成纖維因子和表皮生長因子進行原代培養.主要觀察指標:采用免疫組織化學染色與免疫熒光染色鑒定細胞,并采用流式細胞術測定細胞DNA含量.結果:在相差顯微鏡下觀察培養的神經干細胞,細胞形態豐滿,胞核及核仁清晰可見,神經突起粗大,網絡稠密.免疫組織化學和免疫熒光染色顯示,細胞神經元特異性烯醇化酶,神經蛋白,膠質纖維酸性蛋白酶,微管相關蛋白為陽性.傳代后的細胞用流式細胞術測定DNA含量為正常二倍體,無誘發突變.免疫磁珠的制備及其富集,分離單增李斯特菌的研究。浙江protein A/G COIP免疫磁珠哪家好

建立免疫磁珠法分離,并培養人腦膠質瘤干細胞的方法.方法將術中取得的腦膠質瘤標本,通過剪切、消化和吹打成單細胞懸液,篩網過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細胞,用神經干細胞無血清培養法培養出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導分化,分化前后用免疫細胞熒光化學方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結果免疫磁珠分選出的CD133-細胞,可懸浮生長并形成神經干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經元小管相關蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質細胞膠質纖維酸性蛋白質(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白、CD133陰性,并具有**的核型.結論免疫磁珠分選法可避免原代培養中眾多細胞混雜牛長的發生,能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的**干細胞,細胞結合磁珠后在體外可以長期培養和傳代,進一步證實了**干細胞的存在,并為膠質瘤干細胞的研究奠定基礎.甘肅anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠生產廠家自制免疫磁珠在前列腺tumor組織干細胞提取中的應用。

COIP常見問題及對策

1：如何提高抗體與磁珠結合效率?

磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關，請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（ 30～120min）、提高結合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。

2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?

可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產物的特異性。對 于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。

常見問題及對策

3： 如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現的聚集情況？

磁珠應保存在2～8℃，使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚 集，或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發生聚集屬 于正常現象，不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、 Tween-20 或 Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。經過低pH洗脫操 作的磁珠可以用結合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1% (v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴 處理2min，即可使磁珠恢復均勻狀態，以上處理均不影響磁珠的抗體 結合效率。

4： 如何解決磁珠易粘附管壁的現象？

建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加 0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或 Triton X-100）可以有效降低磁珠對耗材的粘附。

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免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養基下貼壁培養后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好,**長傳代到第20代.分選前后細胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細胞純度大于98%;流式細胞儀檢測hMAPCs中CD29陽性表達細胞比率為99.2%,CD44陽性細胞比率為98.3%,CD34陽性細胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細胞比率為5.3%.結論:CD45,GlyA免疫微磁珠負分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養基中有較強的增殖能力.密度梯度離心聯合上皮細胞黏附分子免疫磁珠富集法檢測卵巢Cancer循環腫瘤細胞及其與腫瘤復發轉移的相關性.河南anti-HA COIP免疫磁珠送貨上門

免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經干細胞的生物學特征。浙江protein A/G COIP免疫磁珠哪家好

常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國外的有Dynal、Qiagen等，國內將磁珠應用于核酸提取的研究起源于02年左右，經過近些年的反復試驗，形成了穩定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾病（如乙肝、丙肝、結核菌）等的定量檢測（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國產磁珠法試劑盒與進口產品相比，已不單單是只具有價格優勢，其產品的穩定性、高效性、提取出的核酸的質量與產量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產試劑盒的推廣是一大挑戰。浙江protein A/G COIP免疫磁珠哪家好

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