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廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

來源: 發布時間:2022-03-13
COIP 磁珠緩沖液匯總

細胞裂解液
正常RIPA 細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
結合緩沖液binding buffer
用RIPA 細胞裂解緩沖液代替
洗滌緩沖液Washing buffer
PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
洗脫緩沖液Elution buffer
直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。

COIP 常見問題及對策


免疫磁珠技術檢測外周血中卵巢Cancer細胞。廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

常見問題
原因
解決方法
高的背景條帶
蛋白非特異結合到抗體,磁珠或EP管上洗滌次數不夠
對裂解液進行預處理去除非特異蛋白; 在***一次洗滌前, 轉移整個樣品到新的EP管中然后進行離心。
洗滌次數不夠
增加洗滌的時間和次數。
無蛋白條帶
Myc 標簽蛋白沒有表達
確保目的蛋白帶有Flag/HA/Myc 標簽; 制備新鮮的裂解液; 使用恰當的蛋白酶抑制劑。
孵育時間不足
增加孵育時間。
樣品中存在干擾物質
裂解液中存在高濃度的DTT,2-mercaptoetMyc nol或者其他的還原劑;

建立檢測人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評估其在***血癥診斷中的價值。方法將Eno重組蛋白耦聯至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG為二抗,優化免疫磁珠法的反應條件,考察其精密度和特異性。收集經血培養確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細菌菌血癥患者(n=30)和健康人對照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測定抗Eno抗體,并與ELISA法結果進行比較。結果免疫磁珠法測定抗Eno抗體的批內、批間變異系數(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對相應抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cutoff值時,診斷***血癥的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特異性與ELISA法比較無統計學差異,但檢測流程從37℃2.5h縮短至常溫1h。結論免疫磁珠法檢測抗EnoIgG類抗體簡便、快捷、可靠,在侵襲性******研究中具有潛在的應用價值。江蘇anti-Flag COIP免疫磁珠供應商BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。

免疫磁珠法(MACS):免疫磁珠法是2O世紀80年代出現的技術方法。1983年Ugelstad提出將免疫磁珠用于細胞分選,1990年,Mihenyi建立了MACS。這一方法的**是在磁珠表面包被具免疫反應性的抗體進行抗原抗體反應,在細胞表面形成玫瑰花結,這些結合了磁珠的細胞一旦置于強大的磁場下,就會與其他未被結合的細胞分群,具***順磁場的磁珠脫離磁場后立即消失磁性,這樣就可以篩選或去除所標記的細胞,從而達到陽性或陰性選擇細胞的目的。這一技術已經***運用于細胞及分子生物學,分離基因、靶細胞及造血干細胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及FACS等方法的確認。免疫磁珠可以有效地分選細胞,從而決定了這一方法在神經干細胞分選中應用的技術可行性。

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarosebeads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。

兔前軟骨干細胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養方法及增殖,表型特征,為細胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環)中的細胞進行原代培養,然后采用免疫磁珠分離系統分選純化PSCs.體外培養,傳代,凍存復蘇,繪制生長曲線,觀察細胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養后成活率高,細胞狀態良好.細胞凍存復蘇后,細胞增殖速度,細胞形態及表面標志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細胞都有明顯的PSCs表面特異性標記物的表達.[結論]PSCs存在于LaCroix環中,免疫磁珠分離法得到的PSCs,體外培養條件下,細胞增殖較快,生物學特性穩定.免疫磁珠分選兔前軟骨干細胞及細胞研究平臺的建立。河南COIP免疫磁珠經銷商價格4折起

CD3/CD28免疫磁珠法體外擴增外周血T淋巴細胞。廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

偶聯單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強作用.方法:經尾靜脈注射SPC-A1-luc細胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發光成像定量監測**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進行micro-CT掃描.利用免疫組織化學驗證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達.結果:免疫磁珠組在第4周即可檢測到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,60.69±0.55和58.25±0.32,注射后的60.30±1.83,61.05±0.68和67.41±3.82.與注射前相比,免疫磁珠組注射后的灰度值***增加,差異具有統計學意義(P=0.0079).生理鹽水組和裸磁珠組注射后的灰度值與注射前相比差異均無統計學意義(均P0.05).結論:偶聯單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描有增強作用,并且有望用于肺*的早期診斷.廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

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標簽: 免疫磁珠
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