免疫磁性細胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細胞,收集到c-kit^+lin-細胞,細胞計數(shù)。取2.0x108個細胞分成10等份,流式細胞儀分析c-Kit^+lin^-細胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細胞活力。計算活細胞的百分率。細胞純度和細胞回收率的計算:細胞純度:分離產物中的陽性細胞數(shù),分離細胞的總細胞數(shù)×100%,細胞回收率:分離產物中的陽性細胞數(shù),起始標本陽性細胞總數(shù)×100%。BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 Cell Nature Science。江蘇蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
BEENbio鏈霉親和素磁珠本產品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價偶聯(lián)而成。這種微球能用于捕獲生物素標記的底物，如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結合是***的非共價生物交互作用之一，因此，這也是親和層析法所使用的一種強大工具。生物分子可以與生物素輕松融合，而層析基質上固定的鏈霉親和素配體可以與之結合，而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性，捕獲所需的底物能夠直接應用于后續(xù)實驗。本產品可廣泛應用于免疫學檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細胞分選等分子生物學實驗。河南蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起B(yǎng)EENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。
免疫磁珠技術(immunomagneticbeads,IMB)是近年來國內外研究的一種新的免疫學技術.隨著納米技術的不斷發(fā)展,納米免疫磁珠具備了良好的磁感應性,超順磁性,高特異性,高濃縮性,高分離率,且不影響細胞活性等優(yōu)點,因此它能從大量外周血細胞中篩選出帶有特異性制備可高效,特異地分離單增李斯特菌的免疫磁珠.探討羧基修飾磁珠與多克隆抗體的不同偶聯(lián)條件和免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.方法:以單增李斯特菌作為抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔源多克隆抗體,鑒定其與單增李斯特菌體的結合能力;選擇6種不同的偶聯(lián)緩沖溶液,設置了6個主要偶聯(lián)時間和6組偶聯(lián)溫度,通過比較磁珠與抗體偶聯(lián)后上清中剩余的抗體量來確定比較好偶聯(lián)條件.結果:制備的多克隆抗體效價為1.3×105,該抗體與單增李斯特菌體有較好的結合,抗體與1mg羧基修飾磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水嗎啉乙磺酸緩沖溶液(MES)中,37℃偶聯(lián)2h,偶聯(lián)抗體的量為160μg;制得的免疫磁珠的捕獲率可達77.0%.結論:獲得羧基磁珠與抗體偶聯(lián)的比較好條件,該免疫磁珠用于食品中單增李斯特菌的檢測,與常規(guī)的平皿增菌培養(yǎng)顯色法比較,檢測時間至少縮短20h.標記的腫瘤細胞
CoIP ：實驗原理一切從 CoIP 的原理談起：免疫共沉淀是一種以抗體和抗原識別專一性為基礎，用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。實驗步驟第一步：樣品制備首先進行樣品制備，以提取出想要研究的蛋白，由于不同類型的細胞裂解條件有所差異，這里不展開介紹。注意事項：細胞裂解要采用溫和的裂解條件，避免破壞細胞內存在的蛋白間相互作用，裂解、洗滌時需使用非變性裂解液，如 NP-40 和 Triton X-100。此外，由于不同細胞裂解條件不一樣，建議通過預實驗來確定比較好條件。第二步：固定抗體在共沉淀之前，先將固相基質與抗體共同孵育，從而使兩者結合，常用的固相基質有瓊脂糖 Agarose 和磁珠 Magnetic beads。瓊脂糖 Agarose 具有簡單易用，直徑大，結合力強，多孔易吸附的特點；磁珠具有直徑小，背景低，抗體消耗少的特點，但操作時需借助磁力架。注意事項：抗體的選擇十分重要，選經(jīng)過 IP 驗證的抗體，可以減少假陽性概率。同時，要注意抗體/緩沖液的比例，抗體稀釋過度不利于后續(xù)抗原抗體結合；而抗體過多就不能完全沉降在固相基質上，殘存于上清。操作時，為了避免損傷 beads，使用大口徑或截短***頭進行加樣。免疫磁珠的各種系列應用領域還是不一樣的。
利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應用免疫磁珠法對細胞進行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進行傳代接種.培養(yǎng)過程中對細胞進行形態(tài)學觀察,計數(shù)及活力測定;MTY法繪制細胞生長曲線,采用免疫細胞化學熒光染色對細胞進行鑒定并且計算所得細胞純度.[結果]分離培養(yǎng)所得細胞即為雪旺細胞;采用免疫磁珠法能對培養(yǎng)所得雪旺細胞進行純化.純化后雪旺細胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結論]免疫磁珠法可以用于雪旺細胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細胞純度高,活力強,能滿足組織工程人工神經(jīng)的需要.外周血微轉移前列腺Cancer細胞的免疫磁珠法檢測。天津anti-Flag COIP免疫磁珠銷售
免疫磁珠技術應用于肺Cancer中的研究進展。江蘇蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
免疫磁珠法原代分離純化大鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞,并確定其免疫組化特征.方法免疫磁珠法結合傳統(tǒng)的膠原酶消化及篩網(wǎng)過濾法分離出大鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞,采用含有20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng).通過周細胞的形態(tài)和生長方式初步鑒別,再進行細胞α-SMA,vWF,GFAP抗體免疫組織化學特征鑒定,及激光共聚焦顯微鏡行周細胞PDGFR-β和desmin抗體熒光雙標觀察.周細胞生長曲線通過MTT法測定.結果本法獲得的周細胞純度可達98%,并能連續(xù)傳代.原代周細胞約2～3周融合,傳代后生長和融合速度加快,細胞形態(tài)不規(guī)則,胞內可見絲狀結構,無接觸性抑制.免疫組化證實周細胞胞漿內α-SMA蛋白表達陽性,內皮細胞特異性vWF因子表達陰性,膠質細胞特異性GFAP表達陰性.激光共聚焦顯示周細胞PDGFR-β和desmin抗原表達均為陽性.結論本研究***報道應用免疫磁珠法分離培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞.獲得高度純化的周細胞具有明確的免疫組化特征,可用于相關視網(wǎng)膜血管性疾病的進一步研究.江蘇蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
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