免疫磁珠技術(immunomagneticbeads,IMB)是近年來國內外研究的一種新的免疫學技術.隨著納米技術的不斷發展,納米免疫磁珠具備了良好的磁感應性,超順磁性,高特異性,高濃縮性,高分離率,且不影響細胞活性等優點,因此它能從大量外周血細胞中篩選出帶有特異性制備可高效,特異地分離單增李斯特菌的免疫磁珠.探討羧基修飾磁珠與多克隆抗體的不同偶聯條件和免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.方法:以單增李斯特菌作為抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔源多克隆抗體,鑒定其與單增李斯特菌體的結合能力;選擇6種不同的偶聯緩沖溶液,設置了6個主要偶聯時間和6組偶聯溫度,通過比較磁珠與抗體偶聯后上清中剩余的抗體量來確定比較好偶聯條件.結果:制備的多克隆抗體效價為1.3×105,該抗體與單增李斯特菌體有較好的結合,抗體與1mg羧基修飾磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水嗎啉乙磺酸緩沖溶液(MES)中,37℃偶聯2h,偶聯抗體的量為160μg;制得的免疫磁珠的捕獲率可達77.0%.結論:獲得羧基磁珠與抗體偶聯的比較好條件,該免疫磁珠用于食品中單增李斯特菌的檢測,與常規的平皿增菌培養顯色法比較,檢測時間至少縮短20h.標記的腫瘤細胞一個好的免疫磁珠需要具備哪些特點您了解嗎？安徽anti-HA COIP免疫磁珠批量定制
精原干細胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進行基因修飾新方法等研究的前提基礎。采用免疫磁珠分選法,使用干細胞抗體CD90.2進行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細胞分析法和定量PCR驗證了磁珠分選效率。流式細胞分析結果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測結果:磁珠分選后支持細胞特異表達基因GATA4***下調(6倍)、SSCs表達基因GFRα-1上調(6.5倍)、生殖干細胞特異表達基因OCT4極***上調(5.9倍),3個基因相對表達量的變化說明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細胞分析法所產生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉基因熒光的影響。湖南anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制上海普平生物科技有限公司專業致力于免疫磁珠直銷。
分離轉基因小鼠骨髓造血干細胞.運用針對小鼠干細胞表面特異表達的干細胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細胞,用流式細胞術(FACS)檢測MACS分離后骨髓細胞中干細胞(Sca-1陽性細胞)比例,監測細胞分選效果.結果顯示MACS分離后骨髓細胞中Sca-1陽性細胞所占比例達85%以上,涂片觀察發現細胞組成和細胞形態學特征與FACS所得結果一致.MACS可以從轉基因小鼠全骨髓細胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細胞,細胞純度可達85%以上.
兔前軟骨干細胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養方法及增殖,表型特征,為細胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環)中的細胞進行原代培養,然后采用免疫磁珠分離系統分選純化PSCs.體外培養,傳代,凍存復蘇,繪制生長曲線,觀察細胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養后成活率高,細胞狀態良好.細胞凍存復蘇后,細胞增殖速度,細胞形態及表面標志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細胞都有明顯的PSCs表面特異性標記物的表達.[結論]PSCs存在于LaCroix環中,免疫磁珠分離法得到的PSCs,體外培養條件下,細胞增殖較快,生物學特性穩定.BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。
COIP實驗步驟第三步：免疫共沉淀根據不同的抗體結合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復合物。如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads，先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。如果使用了交聯劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。第四步：洗脫與檢測***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫，并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當蛋白或抗體對低 pH 的緩沖液敏感，可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。注意事項：如后續需進行酶活或功能性分析，則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。對于交聯劑結合的 beads，為了保持抗體偶聯樹脂的活性，應立即再生和存儲樹脂，保證抗體可以重復利用。上海普平生物科技有限公司專業致力于免疫磁珠批發。陜西anti-Myc COIP免疫磁珠代理價格4折起
免疫磁珠的特點成為了一個重要因素。安徽anti-HA COIP免疫磁珠批量定制
從白血病KG1a細胞中分選CD34+CD38-干細胞并研究其生物學特性.方法免疫磁珠法分選CD34+CD38-細胞,流式細胞術分析細胞表面膜抗原,細胞周期,甲基纖維素培養體系觀察其克隆性;以HL60,K562,CD34+CD38+細胞為對照,甲基偶氮唑藍法檢測柔紅霉素對CD34+CD38-細胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接種,觀察體內成瘤能力.結果分選的CD34+CD38-細胞純度達95%以上,(69.03±3.25)%處于G0期,克隆形成率為(38.64±2.68)%,明顯抵抗柔紅霉素;不同濃度柔紅霉素作用后,CD34+CD38-,CD34+CD38+,HL60,K562細胞的活性差異有統計學意義(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率***高于CD34+CD38+細胞(P〈0.05).結論免疫磁珠法分選白血病干細胞簡單易行,分選的細胞符合白血病干細胞生物學特性.安徽anti-HA COIP免疫磁珠批量定制
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