體外生產(chǎn)重組蛋白的表達(dá)系統(tǒng)中，哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能夠為重組人源蛋白提供較接近于天然狀態(tài)的翻譯后修飾，在蛋白表達(dá)過程中會形成接近天然蛋白的蛋白質(zhì)折疊和聚合，具備活性蛋白所必須的空間結(jié)構(gòu)和修飾。哺乳動物細(xì)胞翻譯后再加工修飾產(chǎn)生的外源重組蛋白質(zhì)，在活性方面高于原核表達(dá)系統(tǒng)及酵母、昆蟲細(xì)胞等真核表達(dá)系統(tǒng)，更接近于天然蛋白質(zhì)。這些特性使得哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)在重組蛋白藥物，特別是重組單抗藥物的研發(fā)和生產(chǎn)中的具有極大的應(yīng)用。重組蛋白是生物醫(yī)藥行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)中的關(guān)鍵生物試劑。普欣IL-4重組蛋白

購買的重組蛋白單位一般是 μg，重組蛋白檢測結(jié)果和用量常用單位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么？和IU之間有什么差別？它們又是怎么與 μg 進(jìn)行換算的呢？首先，U 是蛋白活性單位，用于計量蛋白本身的生物學(xué)活性。活性單位指在適條件下，單位時間內(nèi)產(chǎn)生單位生物學(xué)效應(yīng)的蛋白量。以酶為例，1961年，國際生物化學(xué)學(xué)會酶學(xué)委員會提出采用統(tǒng)一的「國際單位」（IU）來表示酶的活力，在合適條件下，每分鐘內(nèi)催化 1 微摩爾（μmol）底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物或轉(zhuǎn)化底物中 1 微摩爾的有關(guān)基團所需的酶量。即 1 IU＝1 U＝1 μmol/min。IU 與 μg之間的換算，要引入比活性的概念。比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物學(xué)活性單位，通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶為例，在合適條件下，如果 1 μg 酶可以在 1 分鐘內(nèi)催化 1μmol 的底物，那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重組蛋白的一項重要指標(biāo)。進(jìn)行比活性項目的檢測，不僅可以反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況，而且可以比較不同表達(dá)體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝更先進(jìn)、純度更高、質(zhì)量更優(yōu)。普欣IL-4重組蛋白選擇合適的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，至關(guān)重要。

在重組蛋白生產(chǎn)中，酵母表達(dá)系統(tǒng)與大腸桿菌表達(dá)有所不同，大腸桿菌表達(dá)只需將質(zhì)粒/載體轉(zhuǎn)入到宿主菌體內(nèi)，其載體攜帶復(fù)制原點隨著宿主染色體的復(fù)制而復(fù)制，可以穩(wěn)定存在。而酵母表達(dá)相對復(fù)雜，設(shè)計的質(zhì)粒/載體均不帶有酵母自身復(fù)制原點，因此如果直接導(dǎo)入到宿主菌中，不能穩(wěn)定存在。所以必須將質(zhì)粒/載體線性化，以同源重組的方式與宿主菌的染色體進(jìn)行整合，這樣外源基因才能夠穩(wěn)定存在，而且同源重組一旦形成會很穩(wěn)定，在通過后期的篩選排除沒有整合成功的質(zhì)粒/載體和宿主菌，挑選整合成功并能夠高表達(dá)的重組轉(zhuǎn)化子，某種程度上與哺乳動物穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建原理類似。

在科研實驗中，重組蛋白的生物學(xué)活性通常以ED50來表示。在大多數(shù)情況下，研究人員一般基于各類指示性細(xì)胞——如某些原代細(xì)胞或細(xì)胞系——來開展生物分析。常用的生物分析法包括細(xì)胞增殖分析，細(xì)胞趨化性分析，細(xì)胞因子生成分析和細(xì)胞毒性分析。通常以ED50來表示某一細(xì)胞因子的生物活性，該值表示能夠誘發(fā)50%大效應(yīng)的細(xì)胞因子濃度。這一表示效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細(xì)胞因子。ED50被定義為處于max反應(yīng)50%水平的細(xì)胞因子濃度。這一表示現(xiàn)效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細(xì)胞因子。將ng/mL單位的ED50活性值（注意：如當(dāng)前為pg/mL，請先換算為ng/mL）轉(zhuǎn)換為（注意：如需當(dāng)前單位為pg/mL，請先換算為ng/mL）單位/毫克（unit/mg）特定活性值的公式為（當(dāng)ED50表示為處于一個范圍區(qū)間時，選擇此范圍的中點值）：1 x 10E6/ED50* (ng/mL) = 以單位/毫克（Units/mg蛋白）表示為單位的特定蛋白特定活性。重組蛋白的活性高低，是實驗成功的關(guān)鍵。

體外生產(chǎn)重組蛋白有多個表達(dá)系統(tǒng)，重組蛋白的預(yù)期用途對于表達(dá)系統(tǒng)的選擇和決定其優(yōu)先次序是很重要的。對于某些應(yīng)用 (如功能解析或藥物篩選) 來說，保持蛋白的天然功能和特性是必需的; 但如果是當(dāng)成免疫原來使用則關(guān)系不大。其他需要實際考慮的因素包括蛋白質(zhì)產(chǎn)量、時間限制或生產(chǎn)成本。明確項目需求對于確保選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)、克隆策略和所需產(chǎn)品的生產(chǎn)策略是至關(guān)重要的。實際上, 在缺少目標(biāo)蛋白質(zhì)或相似蛋白質(zhì)歷史表達(dá)數(shù)據(jù)的情況下，要預(yù)測某個蛋白質(zhì)表達(dá)實驗的結(jié)果是非常困難的。通常的做法是使用數(shù)個表達(dá)系統(tǒng), 一開始使用簡單的、性價比高的表達(dá)系統(tǒng)，失敗后再使用更復(fù)雜的表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白與重組融合蛋白的區(qū)別。普欣TNF-alpha重組蛋白

重組蛋白生物科研試劑總體市場逐年遞增。普欣IL-4重組蛋白

蛋白質(zhì)生物學(xué)不僅包含研究內(nèi)容，也包含了研究所需的工具。即基于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能的研究，和利用抗體、蛋白及多肽等作為純化、檢測和分析生物系統(tǒng)的工具。有些蛋白分析方法（如western blotting和ELISA等）已作為實驗室的常規(guī)實驗方法使用了多年。其它方法如定量蛋白質(zhì)譜的實驗方法則是相對較新的實驗技術(shù)，并且正在快速發(fā)展中。針對重組蛋白純化，賽默飛提供種類豐富的標(biāo)簽選擇，包括6xHis, GST, DYKDDDDK (FLAG), c-myc, 和 HA。還提供一系列磁珠和樹脂等純化產(chǎn)品，磁珠、磁性瓊脂糖、散裝樹脂、離心柱或試劑盒，F(xiàn)PLC層析柱，96孔過濾板等，用于從大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)中純化從微克(μg)到低千克(kg)級重組蛋白。可滿足大多實驗的需求，包括高通量篩選、批量處理、中試和工藝純化等。普欣IL-4重組蛋白

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