芯棄疾JX-8B數字ELISA產品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測我們的方法利用了亞飛克爾反應室陣列(圖1C)我們稱之為單分子陣列(SiMoA)——可以分離和檢測單個酶分子20-24。這種方法借鑒了Walt等人20-23的工作陣列用于研究單個酶的動力學和抑制作用。我們的目標是利用捕獲和檢測單個酶的能力來檢測用酶標記的單個蛋白質分子。在這個單分子免疫測定的第一步(圖1A),在微球(直徑μm)上形成一個三明治抗體復合物,結合的復合物用酶標記,如同常規的基于微球的ELISA。當測定含有極低濃度蛋白質的樣品,蛋白質的比值分子(以及由此產生的酶標記復合物)與微球的比例很小(通常小于1:1),因此含有標記免疫復合物的微球百分比遵循泊松分布,導致單個微球上存在單一免疫復合物。例如,如果在(3000個分子)的蛋白質中捕獲并標記了50μM的蛋白質,并且在200,000個微球上進行標記,則珠子,然后,。無法檢測到這些低數量的酶使用標準檢測技術(例如,平板閱讀器)的標簽,因為熒光染料由每種酶生成的產物擴散到一個大卵試驗體積(通常為),并進入其中需要數十萬種酶標簽才能產生高于該水平的熒光信號背景。芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產品,超敏檢測,常規試劑可輕松達到0.2pg!單分子技術數字ELISA極速檢測
創新性的解決方案:芯棄疾JX-8B數字ELISA;使用新型的fg級超敏免疫檢測simoa單分子產品原理;
它是一種DVD大小的圓盤,由24個陣列組成,每個陣列包含240微米大小的微孔,這些微孔呈徑向排列,以便使用藍光制造工藝和儀器內的液體處理并行處理。圖2B顯示了集成陣列及其相關流體通道的設計。每個陣列由216,000個40飛升大小的微孔組成,以六邊形緊密排列模式排列在平面表面的3×4毫米區域內。每個微孔的標稱尺寸為4.25μm直徑、3.25μm深度和8μ米中心間距。流體通道深0.5毫米,通道和流體入口端口的總體積為74μLto,可容納珠子和密封油溶液。通道中包含一個收縮部分以減少液體回流。微珠的分級是西莫亞技術的關鍵要求,微孔的幾何形狀足以容納單個微珠(2.7μmdiameter;以下簡稱珠子)。西莫亞圓盤由環烯烴共聚物(COP)制造,因其具有高通量注塑成型的適應性,且成本低廉。具有良好的化學、生物和光學性能 高科技數字ELISA快速檢測芯棄疾單分子芯片依托單分散陣列化技術,實現飛克級高靈敏檢測,可捕獲數十萬反應磁珠。
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由于活性珠子的百分比接近50%(酶與微球的比例大于~1:1.5),然而,使用圖像分析軟件區分“開啟”和“關閉”孔變得具有挑戰性,我們達到了數字動態范圍的實際上限。例如,圖2中7fM(~45%活性)的信號偏離了線性。因此,這里使用50,000個孔展示的數字線性動態范圍是從3.5fM到350zM,即大約四個對數單位。前提是蛋白質使用適當的酶濃度進行標記,這種動態范圍對于許多臨床應用來說是足夠的
超多重檢測的臨床數據價值:標記物組合的精細篩選,超多重檢測芯片通過21項指標的同步檢測,為疾病診斷提供了多維數據支持。在肺*普查中,同時分析29種標記物的表達模式,可構建特異性>80%的三聯檢測模型(如CEA+SA+CA242),較單一指標檢測準確率提升40%。在炎癥反應評估中,IL-6、IL-8、TNF-α等多因子聯合分析,可精細判斷***類型與嚴重程度,指導個體化治療方案。該芯片的高通量特性還支持大規模隊列研究,通過機器學習算法挖掘標記物組合的潛在關聯,為精細醫療中的生物標志物發現提供了強大的數據分析基礎,推動檢測技術從單一指標診斷向多維度精細分型升級。新型的單分子檢測方法的普及版;
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動力學上,對于200,000個微球分散在100μL中,珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA(分別為17.3和30kDa)的蛋白質將在不到1min的時間內擴散80μm。表明,在2小時的孵育過程中,蛋白質分子的捕獲不會受到限制動力學上。其次,必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個珠子加載到50,000孔陣列中,通常會導致20,000–30,000個微球被困在1mL孔中。對于典型的背景信號為1%活性微球(見下文),這種裝載導致背景信號為200-300個活性微球檢測到,對應于泊松噪聲的可接受變異系數(CV)為6-7%。第三,過高的微球濃度可能導致:a)非特異性結合增加,降低信噪比;以及b)分析物與微球的比例過低,導致活性微球的比例過低,從而導致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬到100萬顆珠子是比較好的數字ELISA。同時,為了獲得可接受的背景信號(1%)和泊松噪聲)。 芯棄疾單分子ELISA檢測試劑盒,多重超敏檢測,多重指標也能檢測到亞皮克級!醫療檢測數字ELISA快速檢測
數字 ELISA 芯片標準化生產流程嚴格,成品質檢全檢,良品率穩定在 98% 以上。單分子技術數字ELISA極速檢測
自動化檢測與數據算法的深度融合:芯棄疾芯片搭載四參數Logistic曲線擬合(方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^B]+D)與二次回歸算法(y=a+bx+cx2),確保熒光信號與濃度的高度線性關聯(r2≥0.999)。以IL-6檢測為例,自動版設備通過AI驅動圖像分析(CNN網絡),識別磁珠熒光強度(CV<3%),比較低檢測限達0.5pg/mL,較手動操作靈敏度提升2倍。在質量控制中,芯片內置內參校準通道(如β-actin),自動校正批次間差異,使檢測重復性(CV<5%)達到ISO15189標準。此外,數據平臺支持云端存儲與多中心結果比對,為大規模流行病學研究(如10萬人隊列)提供標準化數據支持。單分子技術數字ELISA極速檢測