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云南實驗動物模型培養

來源: 發布時間:2024-02-05

    結果發現在這些組織中,gm20541均有表達,說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法:(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾,充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后,在冰上裂解20min。(3)4℃,16000g離心10min后,取上清轉移至另一干凈離心管,加入50μl的蛋白上樣液,混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后,分別取20μl,160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后,根據需要,裁剪適當大小的硝酸纖維素膜,按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙,并趕去氣泡,轉膜槽放入冰水浴中,采用恒流,轉膜2h。(6)轉膜完畢后,純水沖洗硝酸纖維素膜一遍,晾干并標記。然后用8%的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后,加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗,4℃孵育過夜。(8)回收一抗,1×tbst緩沖液洗膜4次,每次10min,根據一抗來源,選擇合適二抗,用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗,室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后,用1×tbst洗膜3次,每次10min,用thermo的elc發光試劑盒檢測蛋白。可提供專業的大鼠小鼠動物疾病模型技術,包含心血管系統神經系統、呼吸系統、生殖、泌尿系統、成瘤系統等。云南實驗動物模型培養

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    放血致失血性貧血小鼠模型一、服務信息1、動物模型名稱:放血致失血性貧血小鼠模型2、實驗動物種屬:KM小鼠3、實驗動物性別:雌雄不限4、實驗動物年齡:約4周齡5、實驗動物體重:18~22g6、實驗動物環境:SPF級二、服務項目服務編號服務內容服務周期價錢DH2014放血致失血性貧血小鼠模型3個工作日詢價1、實驗方法:眼眶靜脈叢放血法。小鼠通過眼眶靜脈叢放血,,并測外周血紅細胞總數(RBC)及血紅蛋白含量(Hb)。24h后所有小鼠眼眶靜脈叢檢測外周血RBC總數及Hb含量。2、檢測標準:模型組小鼠放血后24小時的外周血RBC總數及Hb含量較放血前明顯下降,低于正常值參考值,且與正常對照組比較具**性差異(P<),表明成功構建了失血性貧血動物模型造模。三、交付標準:1.提供動物模型構建過程中的原始實驗記錄及數據圖片。2.根據要求提供構建成功的模型動物或相關組織材料。四、服務項目說明:1、如有特殊要求,請另詢價。2、雙方簽訂合同后,收取70%首付后啟動實驗。基因敲除動物模型飼養(arteriosclerosis,AS)是一種緩慢進行性疾病,嚴重影響人類健康。

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    然后5%的nds。含有%triton)封閉通透2h,孵育一抗,4℃過夜。第二天,pbs清洗三次后,孵育相應的熒光二抗,然后再用pbs清洗三次,封片,觀察。結果見圖8,在小鼠4月齡時,通過視網膜冰凍組織切片染色外節抗體rhodopsin以及內節抗體nak-atpase后發現,相較于野生型小鼠,gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網膜外節明顯縮短,表現出了明顯退化表征。綜上,可以看出,本發明實施例以小鼠為例,通過cre-loxp基因敲除技術,在小鼠視網膜前體細胞中特異性敲除gm20541基因,小鼠表現出了視力受損,視細胞外節變短退化以及視細胞丟失等視網膜色素變性疾病典型表征。由此充分說明,在視網膜前體細胞敲除gm20541基因,可以使目標動物表現出視網膜色素變性疾病。視網膜前體細胞敲除gm20541基因的動物,可以作為視網膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網膜色素變性疾病研究等領域中,為該疾病的研究例如發病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發明實施例展示了在小鼠的視網膜前體細胞敲除gm20541基因后的表型,但本領域技術人員容易理解到,小鼠作為哺乳動物的代表性動物,在其他的哺乳類動物中敲除gm20541基因或其同源基因也應當具有相似的表型。

    可在設定的壓差標準內無極調控,以保障系統對海拔(3000m~7000m)的微負壓進行模擬。并且,進排風風管裝有高效空氣過濾器,使進入飼養倉2的氣體潔凈。實施例3在實施例1的基礎上提供的一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統,所述高原低氧環境模擬裝置包括惰性氣源,所述惰性氣源與進風系統13連接,所述惰性氣源與進風系統13之間設置有比例式氣閥,還包括設置在飼養倉2內的嵌入式氧測定儀。本實施例的工作原理:惰性氣源可以是惰性氣體儲備罐或者是液態惰性氣體儲備罐。在模擬低氧環境時,外接惰性氣體儲備罐連接進風系統13。比例式氣閥和嵌入式氧測定儀均與功能控制面板19連接,通過功能控制面板19上的氧濃度表顯示濃度來調節比例式氣閥,通過加惰性氣體來來實現降低氧氣濃度。當倉體內的氧氣濃度較高時,手動打開惰性氣體儲備罐與進風系統之間的氣閥,調節惰性氣體進入量,使倉體內氧氣濃度降低,觀察控制面板上的氧濃度顯示,調整氣閥開度大小,達到需求的氧濃度,以此調節實現高原缺氧環境的模擬。本技術方案采用的惰性氣體為對生命體無危害的惰性氣體。實施例4在實施例1的基礎上提供的一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統。高脂飼料致高脂血癥大鼠模型。

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    可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細胞涂片以及某些薄膜組織的固定。(2)固定的目的①保持其原有狀態:使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質,迅速防止組織、細胞的死后變化,防止自溶與,防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構,使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察:不同組織成分對染料有不同的親和力,以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化,便于制作薄片(組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞)。(3)固定液固定液種類:一類是單純固定液,即只有一種試劑;另一類是混合固定液,由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液,應有下列特性,首先,有強滲透力,能迅速的滲入組織內部;其次,不使組織過度收縮或膨脹,并能使組織內欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質;,能使組織達到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對某些染料具有較強的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的組織,常需要特殊的固定液,取樣之前應做好準備。如眼球樣本應使用FAS眼球固定液,脂肪組織應使用脂肪組織固定液等。此外,在進行骨組織樣本制備的時候,還應注意提前進行脫鈣處理。急性肺損傷(acute lung injury,ALI)。寧夏兔動物模型建模

骨質疏松癥是以骨量減少及骨組織微觀結構為特征的一種全身性骨骼疾病,伴有骨的脆性增加、易于發生骨折。云南實驗動物模型培養

    brain:腦組織;liver:肝臟;retina:視網膜,intestine:腸;muscle:肌肉;heart:心臟;kidney:腎臟;spleen:脾;b:圖1中a的統計結果;c:westernblot檢測gm20541蛋白在不同組織的表達;d:圖1中c的統計結果。圖2:gm20541基因敲除小鼠的構建路線;圖中sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖3:中長距離pcr鑒定子一代鼠的結果;圖中:a:擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r,擴增產物為;其中a2,3,6,9,10,b1為陽性;b:擴增3’端長臂使用引物對neof和gm3’lrr,擴增產物為。其中:a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子,+/+為野生型對照。圖4:gm20541基因敲除小鼠的鑒定;a:gm20541基因敲除小鼠的基因型鑒定結果;b:實時定量pcr實驗分析gm20541敲除小鼠視網膜中基因敲除效率,證明gm20541在敲除小鼠視網膜中不再表達;sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖5:暗適應視網膜電圖(electroretinogram,erg)檢測結果;圖中:a-c:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖軌跡圖;d:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖a波統計。云南實驗動物模型培養

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