為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協議，并且可以自動化用于高通量應用。異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。水溶熒光染料Cy5

異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）：FITC是應用*為***的一種熒光素，經激光激發后發出明亮的黃綠色熒光，*大發射波長為525nm。FITC的熒光強度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質檢測(b)蛋白質和肽的微測序分析(c)使用毛細管區帶電泳進行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標記DNA片段進行細胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯后的大消光系數和高量子產率），使其成為許多工藝的優先染料。在流式細胞術和免疫熒光顯微術中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應基團，這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團具有反應性。中國澳門熒光染料外泌體南京星葉生物提供多種性價比高的各類活化熒光素，例如Cy系列、Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）等。

熒光染料:能發出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉變為波長較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環或雜環并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉移技術合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發波長被激發，在供體分子的發射波長發射一個光子。熒光染料發展非常迅速，已開發的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。

    小動物***熒光成像技術是現***物醫學研究領域的一項重要技術，因其具有操作簡單、實時直觀、靈敏度高、實驗成本低等特點，已廣泛應用于生命科學、醫學研究及藥物開發等方面。納米材料在生物醫學領域得到廣泛應用，旨在解決傳統醫學面臨的各種醫學挑戰，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優點，比如多功能性、大的負載量、靶向性、血液循環時間長等。納米材料在生物醫學中起著關鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點，如特定的***、組織甚至細胞。光學成像主要包括生物發光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標記細胞或ＤＮＡ，其表達產物與莖火蟲素類底物反應產生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機熒光染料、熒光上轉換納米粒子、量子點等的應用。 Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環氧化合物。

3.粘壁細胞的染色（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。（2）從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。（4）在37℃培養細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，培養5～10分鐘，然后吸干培養基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細胞可以分別用經典的FL1，FL2，FL3和FL4流式細胞儀檢測。 Cy3 (Cyanine 3) 是一種發橘黃色熒光的花青素熒光染料。河南國產熒光染料

CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩定的熒光標記試劑。水溶熒光染料Cy5

其他細胞結構常用染料生物染料在細胞結構和組分鑒定中有著廣泛的應用，除細胞膜研究外，我們經常也會對一些其它細胞結構及成分進行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質、細胞核等，而對于不同的細胞結構有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液（DAPIStainingSolution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。鬼筆環肽（Phalloidin）是細胞骨架的染色神器，羅丹明標記的Phalloidin（TRITC-Phalloidin）可將細胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態變化時經常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環肽（橙紅）染色的細胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍色）染色的細胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達或下調前后PDAC細胞形態的變化。水溶熒光染料Cy5