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來源: 發布時間:2024-08-27

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。由于PEI在細胞內不可降解,所以分子量越高,細胞毒性越強。此外,具有較高分子量的PEI形成更穩定的聚合物,使其更容易轉染,但更難在細胞內釋放核酸。另一方面,PEI產生的復合物分子量降低,更難以轉染;但它更容易釋放核酸。因此,確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現的。然而,一些改進使PEI在應用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯,可***降低細胞毒性并保持較高的轉染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺,伯胺的乙酰化,或在聚合物結構中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團,可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產生的化學物質在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。在大腸桿菌細胞中復制的質粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序,這與細菌DNA中的頻率相似。河北lipo3000轉染試劑

納米顆粒在疫苗遞送中往往表現出***的佐劑作用。陽離子聚合物,包括PEI、聚賴氨酸、陽離子葡聚糖和陽離子明膠,已經有報道顯示出對Th1反應的強烈刺激,其特征是誘導CD4(+)T細胞增殖和th1相關細胞因子的分泌。此外,陽離子聚合物強烈抑制LPS誘導的巨噬細胞分泌TNF-α。陽離子聚合物的刺激能力與其陽離子化程度有關,陽離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會影響其刺激能力,分子越大意味著刺激能力越大。河北lipo3000轉染試劑在轉染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。

RNA和信使RNA與DNA轉染類似,RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比,RNA轉染可能產生更高的轉染效率,因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下,RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發癥,從而允許表達特定的,所需的蛋白質。然而,RNA轉染后,蛋白質表達是短暫的,與DNA相比,RNA的穩定性相對較差,因此在細胞內運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子,具有調控轉錄后基因調控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發夾RNA(shRNA)等。microRNAs和piRNAs都是內源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始,參與下游mRNA的轉錄后調控。與miRNAs和piRNAs類似,siRNA也在調控轉錄后基因表達中發揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp,可表達為內源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發夾環的內源性雙鏈小RNA。shRNA可以結合mRNA上的互補序列來降解它。

脂質顆粒的加入導致內體DNA釋放增加。Delgado等人通過在腎細胞中添加魚精蛋白,設法提高了固體脂質納米顆粒的轉染效率,但與不添加魚精蛋白的對照組相比,相同的多功能單元,DNA/魚精蛋白/SLN(固體脂質納米顆粒),降低了HEK 293細胞系(人胚胎腎細胞)的轉染效率。這給了我們希望,通過加入必要的配體的可能性,使用納米顆粒的轉染可能會調整到給定的細胞類型。Bahrami et al.經表明,不同種類的納米顆粒以不同的方式與細胞膜結合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀,也取決于不同納米顆粒所表現出的各種粘附電位以及它們進入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實驗表明,納米顆粒的大小對COS-1(非洲綠猴腎細胞)和HEK 293細胞系的轉染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時,轉染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中,小顆粒和大顆粒的細胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的,這表明使用納米顆粒進行基因傳遞的效率受到許多因素的影響,它們的使用應該根據細胞類型和應用條件進行具體調整。此外,用作納米顆粒分散劑的不同物質,如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白,對其在溶液中的團聚有***影響。超聲輔助轉染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔,以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。

脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs),是由非離子核酸與陽離子脂質體(CLs)表面結合,**終形成多層脂質-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面,**初與停靠在陽離子囊泡表面的核酸分子形成復合物,然后發展到核酸分子持續粘在脂質分子上的階段,脂質雙分子層圍繞緊實的核脂質顆粒。復合物形態的這種異質性可能歸因于囊泡的脂質組成、復合物形成的方式、脂質:核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外,疏水相互作用被認為有助于脂質和核酸之間的復合物形成。因此,根據正電荷(陽離子脂質)與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比,脂質體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用,或通過與質膜疏水區域的疏水相互作用進入細胞。PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。河北lipo3000轉染試劑

轉染是將外源核酸送入細胞的過程,其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。河北lipo3000轉染試劑

由于CRISPR/Cas的發現,基因組編輯領域經歷了一場**。細菌免疫系統的CRIPSR/Cas成分導致全基因組雙鏈DNA斷裂,并通過內部DNA修復過程促進基因編輯。有研究指出,陽離子聚合物聚乙二胺-環糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質粒的有效遞送。當大質粒通過PC傳遞時,它們可以以高N/P比聚結并包裹質粒;這有效地編輯了兩個基因組位點:血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發了巨噬細胞特異性啟動子驅動的Cas9表達質粒(pM458和pM330),并將其包裹在陽離子脂質輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中,以解決無法在靶組織和細胞中進行精確基因編輯的問題(CLAN)。基于陽離子聚合物的基因***在臨床試驗中顯示出巨大的潛力,但由于研究仍處于早期階段,目前大多數研究都處于臨床前階段。河北lipo3000轉染試劑

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