三、細胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗：D-熒光素鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配制）1、貼壁細胞：將細胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時或過夜，使細胞貼壁。懸浮細胞：可以將細胞接種于培養(yǎng)板后直接進行后續(xù)操作，無需孵育。如果倍增時間相對較短，則應考慮倍增時間進行細胞計數(shù)。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中，制備成100X熒光素儲備液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。3、用預熱好的細胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml），即配即用。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。5、在成像前，將適量熒光素工作液加入細胞中，然后進行圖像分析。注意：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。孵育時間取決于特定的細胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了，根據(jù)需要進行測試和調(diào)整。6、每隔10分鐘，**多40分鐘，使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光，確定動力學曲線并找出細胞的峰值成像時間點CY7.5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩(wěn)定的熒光標記試劑。內(nèi)蒙古顯微鏡熒光染料

一種發(fā)光雜環(huán)化合物，存在于生物發(fā)光的生物體中，如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下，通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光。可用于熒光素酶生物發(fā)光成像和細胞高通量篩選應用。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結構并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測定細胞活力以及細菌計數(shù)。它還用于報告基因檢測。可與小動物***成像系統(tǒng)配套使用，用于標記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測。D-熒光素游離酸（D-Luciferin,freeacid）、D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-熒光素鈉鹽（D-Luciferin,sodiumsalt），鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的，因為它們都易溶于水。鉀鹽也是***動物檢測使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nm。顯微鏡熒光染料高分子羰花青染料用作 Di 來標記細胞、細胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。

選擇熒光染料時要考慮那些因素：激發(fā)波長處的消光系數(shù)應盡可能高：消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。熒光染料應該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為：對于STORM實驗，您需要一個閃爍的熒光團。但是，對于分子跟蹤實驗，您***不想要閃爍的熒光團。活/死細胞滲透性。您想要的反應側基（例如HaloTag、抗體等）。當您使用多個熒光探針時，尤其是當您量化共定位時，請謹慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨測試所有熒光探針以評估滲透。

一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右。

熒光染料在細胞實驗中具有廣泛的應用1、細胞膜標記：可以使用熒光染料標記細胞膜，以觀察和研究細胞膜的動態(tài)和結構變化。2、染色體和DNA標記：用熒光染料標記染色體或DNA，可以觀察和分析DNA復制、轉錄、修復等過程3、蛋白質(zhì)標記：通過熒光染料標記蛋白質(zhì)，可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運動等特性。4、細胞器標記：使用特定波長的熒光染料可以標記和可視化細胞中的線粒體、溶酶體等細胞器。5、神經(jīng)科學應用：熒光染料在神經(jīng)科學中也有廣泛應用，如標記神經(jīng)元和突觸，觀察神經(jīng)信號的傳遞等。6、基因表達分析：通過熒光染料標記基因表達產(chǎn)物，可以定量分析基因的表達水平和細胞中的分布情況。南京星葉生物熒光染料標記蛋白。青海熒光染料luc

D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。內(nèi)蒙古顯微鏡熒光染料

熒光標記技術是指運用熒光染料與待研究對象結合，利用它的熒光特性，提供待研究對象相關信息。熒光標記具有操作簡便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢，使熒光染料在生命科學研究中應用，包括：標記活細胞或固定細胞中的蛋白質(zhì)、多肽；作為功能性指示劑表征細胞健康狀況；設計各種熒光探針，尋找特定蛋白或藥物靶點。應用分類：多肽、蛋白、抗體標記：氨基標記、巰基標記、羧基標記；***成像：水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料，了解更多（包括但不限于）

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