管可用于實驗室的熒光團數量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：熒光染料:這些是用于在體外標記生物相關分子的小型有機天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質，由于它們的大分子結構而發出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點:這些高熒光合成納米晶體由半導體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應用和該領域的顯著進步，已經針對特定應用和儀器開發和優化了數百種活性熒光染料。同樣，多年來，大量復雜的熒光技術（例如，FRET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發展。5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.細胞核熒光染料高分子

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協議，并且可以自動化用于高通量應用。遼寧熒光染料Fluor 488D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

熒光染料標記蛋白或肽技術是一種常見的蛋白質體外標記技術。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外，目標蛋白還可以通過熒光染料標記直接進行下游實驗操作，如***跟蹤、細胞分選等。

FITC熒光標記的原理是什么？

熒光標記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統化學結構的化合物。當受到紫外線或藍紫光的照射時，它可以被刺激為刺激狀態。當激發狀態恢復到基本狀態時，它會發出熒光。蛋白質熒光標記技術利用熒光材料的共價結合在目標分子的基團上，利用其熒光特性提供研究對象的信息。

蛋白熒光標記技術是目前**為常見的蛋白體外標記技術，利用級聯放大反應原理，將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結合后，標記到特異性抗原或抗體分子上，應用熒光顯微鏡觀察熒光標記物因增強放大效應而產生顏色、光譜等變化，以分析示蹤相應抗體或抗原性質與含量的方法。該技術在具有高度精確性的熒光顯微鏡下，借助高度靈敏性的熒光檢測，在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化，從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標記已成為研究蛋白質互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標記常用熒光染料隨著蛋白熒光標記技術不斷發展，各類熒光素廣泛應用于生物實驗中，目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素，其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm，例如Cy系列、SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）等，用于標記抗體、多肽以及蛋白功能基團，繼而生成分子探針，通過熒光成像進行相應檢測。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。

一、體外生物發光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養細胞的培養基圖像分析前，向細胞培養板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。細胞核熒光染料高分子

動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光發光兩種技術。細胞核熒光染料高分子

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設所需的標記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運行偶聯反應1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質樣品中于溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應管底部。請勿混勻，否則2)將反應管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉幾次以充分混合5.偶聯偶聯物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯偶聯物的范例。1)根據制造說明準備SepHadexG-25柱。2)將反應混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。細胞核熒光染料高分子