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亞硫酸鹽甲基化重測序技術服務

來源: 發布時間:2021-10-22

DNA去甲基化分為兩類:主動去甲基化(Active DNA Demethylation)和被動去甲基化(Passive DNA Demethylation)。基因組甲基化模式的形成主要依賴于主動去甲基化,主要涉及一類具有DNA去甲基化功能的蛋白,可能存在的五種機制a. DNA轉葡糖基酶參與的堿基切除修復(base excision repair;BER):5-mC 由DNA 轉葡糖基酶直接去除。此途徑主要存在于植物體內,動物體內也可能存在。b.脫氨酶參與的堿基切除修復:5-mC 脫氨變成胸腺嘧啶T,形成G/T 錯配,進入BER 途徑。這一途徑主要存在于動物體中,植物體中也可能存在。c.核苷酸外切修復機制(nucleotide excision repair;NER):直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化:發生氧化反應打開碳-碳鍵,直接去除甲基基團。e.水解去甲基化:水解胞嘧啶的甲基基團,使其以甲醇的形式被釋放。DNA被動去甲基化是指當DNMTs活性被抑制或濃度過低時,無法維持原有的甲基化狀態,使DNA甲基化程度降低的過程,這類去甲基化通常發生在細胞復制的兩個周期之間,涉及到某些可與DNMTs結合的因子,其結合后形成的復合物可以阻止DNMTs與DNA的結合。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一。亞硫酸鹽甲基化重測序技術服務

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發育以及人類tumour發生,起著至關重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點,相應的技術也是層出不窮,根據實驗目的的不同,這些技術大體能夠分成兩類:全基因組甲基化檢測技術以及特異性位點甲基化檢測技術。翼和特色內容目標區域甲基化測序自主知識產權超高重PCR為基礎,目標甲基化區段特異性捕獲,更具針對性,經濟型基于二代測序,可以獲得目標區域內所有C的甲基化數據~500X的測序深度,精確計算每個位點C的甲基化程度通量高,可同時對成百上千個區域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區域的DNA甲基化水平檢測Q30>80%檢出率90%以上,90%以上測序片段測序深度>10X。浙江目標區域甲基化重測序哪個公司做全基因組甲基化測序:利用Bisulfite(亞硫酸鹽)對基因組進行處理后上機測序。

目標區域甲基化重測序(Hi-Methylseq)結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術,可實現多區段、多位點的甲基化精確定量分析,特別適合隊列樣本目標區域的甲基化分析,測序深度高,結果更加準確。適用于感興趣目的片段甲基化研究;適用于在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點(DMR)。農口上:表觀遺傳學研究、品種鑒定、品種改良;醫口上:tumour早期診斷、表觀遺傳學生物標志物開發、tumour復發的 預測因子。

DNA甲基化即在DNA上增加甲基基團,是使基因的轉錄抑制或沉默的主要方式。該修飾特異性地發生在CpG位點,胞嘧啶通過磷酸鹽與鳥苷酸連接(圖1)。甲基基團的插入改變了DNA的表觀和結構,可能會直接阻礙DNA的識別及與轉錄因子的結合,或者吸引其他因子優先與DNA結合,干擾轉錄因子的結合。目前已鑒定了三個與甲基化DNA結合的蛋白家族,包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso樣蛋白、以及SRA蛋白。通過招募這些蛋白,DNA甲基化可促進某些組蛋白狀態的維持,如去乙酰作用,從而保持轉錄后的組蛋白修飾。例如,MBD家族的甲基CpG結合蛋白2(MeCP2)與甲基CpG結合,招募HDACs,可促使染色體濃縮和轉錄抑制。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不變。

全基因組重亞硫酸鹽甲基化測序(WGBS)可以在全基因組范圍內精確的檢測所有單個胞嘧啶堿基(C堿基)的甲基化水平,是DNA甲基化研究的金標準。WGBS能為基因組DNA甲基化修飾的研究提供重要技術支持,能廣泛應用在個體發育、衰老和cancer發生等生命過程的機制研究中。其原理是用 Bisulfite 處理DNA序列,首先將基因組中未發生甲基化的 C 堿基轉換成U(T),從而與原本具有甲基化修飾的堿基C區分開來,然后進行PCR擴增,結合高通量測序技術,適用于全基因組范圍內繪制單堿基分辨率的DNA 甲基化圖譜。DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。河南目標區間甲基化重測序哪里做

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DNA甲基化是在DNA甲基化轉移酶(Dnmt)的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的過程,剛被發現時被定義為第五種堿基,實際上它是一種重要的表觀遺傳學標記,在調控基因表達、維持染色質結構、基因印記、X染色體失活以及胚胎發育等生物學過程中發揮著重大的作用,獲得全基因組范圍內所有C位點的甲基化水平數據,對表觀遺傳學的時空特異性研究具有重要意義,Bisulfite甲基化測序是以新一代高通量測序平臺為基礎,結合全基因組Bisulfite處理和生物信息數據分析技術,進行低成本、高效率、高準確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。亞硫酸鹽甲基化重測序技術服務

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