DNA甲基化（DNA methylation）為DNA化學(xué)修飾的一種形式，能在不改變DNA序列的前提下，改變遺傳表觀。 DNA甲基化在維持細(xì)胞正常功能、傳遞基因組印記，胚胎發(fā)育、tumour發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用，目前已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的研究熱點(diǎn)。DNA甲基化測(cè)序可在全基因組水平上比較大限度的、完整的獲取甲基化狀態(tài)信息和與基因表達(dá)調(diào)控的多重關(guān)系，可高效精確完成全基因組甲基化測(cè)序及*分辨DNA甲基化譜式繪制，并可對(duì)發(fā)現(xiàn)的靶點(diǎn)區(qū)進(jìn)行甲基化特異性PCR驗(yàn)證。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上，是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里做

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾，它被認(rèn)為在許多生物學(xué)過(guò)程和疾病中有著重要的作用。隨著測(cè)序技術(shù)的快速發(fā)展，二代測(cè)序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結(jié)合產(chǎn)生了可以在全基因組單堿基水平上測(cè)量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測(cè)序（whole-genome bisulfite sequencing，WGBS）技術(shù)。WGBS的流程與全基因組DNA測(cè)序主要區(qū)別于DNA文庫(kù)的構(gòu)建。以MethlyC-seq為例，將DNA 段化后收集特定長(zhǎng)度的片段并修復(fù)DNA末端，再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭，接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U）， 終進(jìn)行低循環(huán)數(shù)的PCR擴(kuò)增后完成建庫(kù)，建庫(kù)完后上機(jī)測(cè)序，得到原始數(shù)據(jù)（fastq文件）后，完成一定的質(zhì)量控制后就可以進(jìn)行mapping分析。上海bisulfite甲基化重測(cè)序準(zhǔn)確度高DNA甲基化是指針對(duì)DNA序列上的CpG島，由甲基化轉(zhuǎn)移酶將S腺苷甲硫氨酸的甲基轉(zhuǎn)移給胞嘧啶。

目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序（Hi-Methylseq）結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析，特別適合隊(duì)列樣本目標(biāo)區(qū)域的甲基化分析，測(cè)序深度高，結(jié)果更加準(zhǔn)確。適用于感興趣目的片段甲基化研究；適用于在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽(yáng)性位點(diǎn)（DMR）。農(nóng)口上：表觀遺傳學(xué)研究、品種鑒定、品種改良；醫(yī)口上：tumour早期診斷、表觀遺傳學(xué)生物標(biāo)志物開(kāi)發(fā)、tumour復(fù)發(fā)的 預(yù)測(cè)因子。

DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶，常見(jiàn)于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū)，DNA高度甲基化首先會(huì)影響DNA結(jié)構(gòu)，進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄，引起基因沉默。DNA甲基化為非編碼區(qū)（如內(nèi)含子等）的長(zhǎng)期沉默提供了一種有效的抑制機(jī)制。基因啟動(dòng)區(qū)域內(nèi)CpG位點(diǎn)的甲基化通過(guò)三種方式影響基因轉(zhuǎn)錄活性：DNA序列甲基化直接阻礙轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合；甲基CpG結(jié)合蛋白結(jié)合到甲基化CpG位點(diǎn)與其他轉(zhuǎn)錄抑制因子相互作用；染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的凝集阻礙了轉(zhuǎn)錄因子與其調(diào)控序列的結(jié)合。WGBS的流程與全基因組DNA測(cè)序主要區(qū)別于DNA文庫(kù)的構(gòu)建。

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase, 縮寫(xiě)DNMT）的作用下，基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 縮寫(xiě)5mC）。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能改變某些基因的表達(dá)，從而影響生物學(xué)功能。DNA 甲基化參與眾多的細(xì)胞生命活動(dòng)，包括細(xì)胞分化、組織特異性基因表達(dá)、基因組印記、X 染色體失活等。異常的 DNA 甲基化會(huì)導(dǎo)致發(fā)育異常、tumour等疾病的發(fā)生。以MethlyC-seq為例，將DNA段化后收集特定長(zhǎng)度的片段并修復(fù)DNA末端.杭州甲基化重測(cè)序準(zhǔn)確度高

重亞硫酸鹽測(cè)序本質(zhì)上就是重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與二代測(cè)序（NGS）的結(jié)合。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里做

表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對(duì)于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響，而全基因組DNA甲基化研究將是表觀基因組學(xué)為關(guān)注的內(nèi)容之一。Bisulfite處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U，進(jìn)行PCR擴(kuò)增后變成T，與原本具有甲基化修飾的C堿基區(qū)分開(kāi)來(lái)，再結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)，可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。特定物種的高精確度甲基化修飾模式的分析，必將在表觀基因組學(xué)研究中具有里程碑式的意義，并且為細(xì)胞分化、組織發(fā)育等基礎(chǔ)機(jī)制研究，以及動(dòng)植物育種、人類健康與疾病研究奠定基礎(chǔ)。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里做

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