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多重PCR技術甲基化重測序公司

來源: 發布時間:2021-10-24

在表觀遺傳中,DNA甲基化修飾具有非常重要的地位。其中胞嘧啶雜環5號位的甲基化修飾,又稱作5-甲基胞嘧啶(5mC),是**常見的甲基化修飾方式,也是迄今為止研究**為普遍的DNA甲基化修飾方式。一般認為當DNA甲基化出現在基因啟動子區,就會抑制基因轉錄,從而起到負調控的作用。DNA甲基化的形成機制,包括從頭合成(de novo),甲基化的維持(Maintenance)和去甲基化(Demethylation),這些過程分別由不同的基因和通路調控。這些基因和通路在動植物中即保守,又有所區別。Hi-Methylseq方案一次測序反應每個位點測序上百次節約時間、成本、定量準確。多重PCR技術甲基化重測序公司

真核生物基因表達受多種機制、多層面的綜合調控。基因的DNA序列不發生改變的情況下,基因的表達水平與功能發生改變,并可遺傳現象,稱為表觀遺傳(epigenetic)現象。DNA甲基化是指在甲基轉移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區,DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,進而阻遏基因轉錄,引起基因沉默。人體內,DNA甲基轉移酶主要有四種:DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L。在DNA復制完成后,DNMT1是催化甲基轉移至新合成的DNA鏈上,這一現象稱為維持甲基化;DNMT3A和DNMT3B負責催化核酸鏈上新的甲基化位點發生反應,成為形成甲基化;DNMT3L不具有甲級轉移酶活性,其主要作用是調節其他甲基轉移酶的活性。真核細胞內甲基化狀態有3種:持續的低甲基化狀態(如持家基因的甲基化)、誘導的去甲基化狀態(如一些發育階段特異性基因的修飾)和高度甲基化狀態(如人類女性細胞內縊縮-失活的X染色體的甲基化)。河南甲基化重測序技術服務DNA甲基化在DNA復制起始、錯配修復以及轉座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩定性發揮著重要的作用。

DNA甲基化作為重要的表觀遺傳學調控機制在許多關鍵的生物學過程如發育及疾病的進展中扮演著重要的作用,相對于基于PCR、芯片等傳統檢測手段,全基因組亞硫酸氫鹽測序(Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS) 技術可通過將高效的亞硫酸氫鹽轉化與高通量測序文庫構建方法相結合 (Post-BS WGBS),可在單堿基的分辨率下對來自更多樣本基因組中的甲基化位點進行準確的分析,既可以覆蓋所有甲基化位點,還能夠配合靶向技術檢測低頻甲基化信號,已成為目前在業界受到普遍關注的一種主流方法。

物種的DNA甲基化率通常與物種基因組大小成正比。從細菌的數千個基因進化到高等動物的數萬個基因,基因數增長的一個數量級。要管好這么多的基因,在漫長的一生中有規律地關閉或打開基因表達,DNA甲基化這個開關對高等動植物必不可少。轉座子是一類在基因組上可以自主復制(或剪切)和移動的**功能元件。如果它們隨意移動,對基因組的穩定性具有破壞作用。DNA甲基化對轉座子的移動具有抑制作用。通常,物種的基因組越大,其基因組中轉座子的比例越高,那么限制轉座子移動的門神——DNA甲基化的比例就越高。Hi-Methylseq結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術,可實現 多區段、多位點的甲基化精確定量分析。

DNA甲基化主要發生在啟動子區CPG島,在調節基因表達和其他功能方面起著關鍵作用.異常的DNA甲基化可參與調控疾病相關的分子信號通路,從而影響其正常功能。DNA甲基化在生物個體的生長發育與繁殖過程中,維持遺傳物質的穩定性是至關重要的。細胞采用多種機制來保證DNA復制的忠實性,如DNA的雙螺旋結構與半保留復制模式為遺傳物質的穩定提供了物質基礎;DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外還具有5’到3’的核酸外切酶活性,可及時去除錯配摻人的堿基;DNA復制后存在多種修復機制進一步保證了遺傳物質的穩定性。DNA甲基化在DNA復制起始、錯配修復、細菌中寄主控制的修飾與限制以及轉座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩定性發揮著重要的作用。常規全基因組甲基化測序技術通過T4-DNA連接酶,在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列。蘇州目標位點甲基化重測序技術服務

DNA甲基化是研究**為普遍的表觀遺傳修飾,它被認為在許多生物學過程和疾病中有著重要的作用。多重PCR技術甲基化重測序公司

亞硫酸氫鹽測序法用亞硫酸氫鈉對 DNA 進行化學處理會使甲基化特異性序列變異,從而可以通過NGS進行定位和量化,主要的DNA甲基化數據分析流程:獲得DNA甲基化數據之后,首先,需要對數據進行處理和質量的基本控制,包括原始測序和芯片數據的讀取、轉換到產生準確的DNA甲基化圖譜;其次,需要對DNA甲基化位點的結果進行可視化,并且利用統計學方法鑒定樣本特異性差異的DNA甲基化位點;第三,驗證 DNA 甲基化差異位點,并且對其進行生物學解釋。多重PCR技術甲基化重測序公司

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