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上海目標區段甲基化重測序分析

來源: 發布時間:2021-11-03

DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學修飾的一種形式,能在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表觀。 DNA甲基化在維持細胞正常功能、傳遞基因組印記,胚胎發育、tumour發生等方面發揮重要作用,目前已經成為表觀遺傳學和表觀基因組學的研究熱點。DNA甲基化測序可在全基因組水平上比較大限度的、完整的獲取甲基化狀態信息和與基因表達調控的多重關系,可高效精確完成全基因組甲基化測序及*分辨DNA甲基化譜式繪制,并可對發現的靶點區進行甲基化特異性PCR驗證。DNA甲基化分析是經過亞硫酸氫鹽處理后,用PCR擴增目的片段,并對PCR產物進行測序.上海目標區段甲基化重測序分析

目標區域甲基化重測序(Hi-MethylSeq),又叫重亞硫酸鹽擴增子測序(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS)。在前期全基因組甲基化測序、全基因組甲基化芯片等工作基礎上,或者依據文獻報道目的基因甲基化與性狀/疾病關聯,選擇感興趣的目的區間或候選基因,利用Hi-MethylSeq技術對大規模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。Hi-MethylSeq技術通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴增目的片段,添加barcode和測序通用接頭,在Illumina X10二代測序平臺對PCR產物進行高通量測序,利用生物信息學方法,精確定量計算目標區間內的甲基化位點的甲基化狀態,在完成目標區域檢測的同時大幅降低研究費用。廣州多重PCR技術甲基化重測序分析DNA甲基化是在DNA甲基化轉移酶的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)的過程。

DNA甲基化是**早發現的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化*發生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控。脊椎動物DNA的甲基化狀態與生長發育調控密切相關,比如在tumour發生時,抑cancer基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態,導致抑cancer基因表達的下降。

DNA甲基化是表觀遺傳學領域研究的重點之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase, 縮寫DNMT)的作用下,基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉變為5′甲基胞嘧啶(5′ methylcytosine, 縮寫5mC)。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能改變某些基因的表達,從而影響生物學功能。DNA 甲基化參與眾多的細胞生命活動,包括細胞分化、組織特異性基因表達、基因組印記、X 染色體失活等。異常的 DNA 甲基化會導致發育異常、tumour等疾病的發生。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上,是一個關鍵的表觀遺傳標記和基因表達調控因子。

亞硫酸氫鈉修飾后測序法是一種對DNA進行亞硫酸氫鈉處理、聚合酶鏈反應擴增與DNA測序相結合的方法,能夠提供測定區域的序列信息,準確定位甲基化胞嘧啶位點;重亞硫酸鹽修飾后,甲基化胞嘧啶保持不變,但非甲基化胞嘧啶轉變為尿嘧啶,PCR擴增后為胸腺嘧啶,其將甲基化狀態的差異轉化成堿基的差異,從而對胞嘧啶的甲基化狀態進行分析;但在亞硫酸鈉處理的酸性環境下,單鏈特異性PCR模板穩定性下降,容易降解;并且模板鏈CG二核苷酸水平高易形成復雜的二級結構,常出現非特異性條帶,結合“巢式PCR法”能明顯提高擴增的特異度。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴增目的片段,添加barcode和測序通用接頭。江蘇目標區間甲基化重測序哪里做

DNA甲基化主要發生在啟動子區CPG島,在調節基因表達和其他功能方面起著關鍵作用.上海目標區段甲基化重測序分析

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發育以及人類tumour發生,起著至關重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點,相應的技術也是層出不窮,根據實驗目的的不同,這些技術大體能夠分成兩類:全基因組甲基化檢測技術以及特異性位點甲基化檢測技術。翼和特色內容目標區域甲基化測序自主知識產權超高重PCR為基礎,目標甲基化區段特異性捕獲,更具針對性,經濟型基于二代測序,可以獲得目標區域內所有C的甲基化數據~500X的測序深度,精確計算每個位點C的甲基化程度通量高,可同時對成百上千個區域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區域的DNA甲基化水平檢測Q30>80%檢出率90%以上,90%以上測序片段測序深度>10X。上海目標區段甲基化重測序分析

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