在生物系統內，甲基化是經酶催化的，這種甲基化涉及重金屬修飾、基因表達的調控、蛋白質功能的調節以及核糖核酸(RNA)加工。重金屬修飾可以在生物系統外發生。組織樣本的化學甲基化也是組織染色的方法之一。表觀遺傳學的甲基化包括DNA甲基化或蛋白質甲基化。1）DNA甲基化。脊椎動物的DNA甲基化一般發生在CpG位點（胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤位點，即DNA序列中胞嘧啶后緊連鳥嘌呤的位點）。經DNA甲基轉移酶催化胞嘧啶轉化為5-甲基胞嘧啶。人類基因中約80%-90%的CpG位點已被甲基化，但是在某些特定區域，如富含胞嘧啶和鳥嘌呤的CpG島則未被甲基化。這與包含所有普遍表達基因在內的56%的哺乳動物基因中的啟動子有關。1%-2%的人類基因組是CpG群，并且CpG甲基化與轉錄活性成反比。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區，DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,引起基因沉默。安徽多重PCR技術甲基化重測序怎么解決

DNA甲基化主要發生在啟動子區CPG島,在調節基因表達和其他功能方面起著關鍵作用.異常的DNA甲基化可參與調控疾病相關的分子信號通路,從而影響其正常功能。DNA甲基化在生物個體的生長發育與繁殖過程中，維持遺傳物質的穩定性是至關重要的。細胞采用多種機制來保證DNA復制的忠實性，如DNA的雙螺旋結構與半保留復制模式為遺傳物質的穩定提供了物質基礎；DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外還具有5’到3’的核酸外切酶活性，可及時去除錯配摻人的堿基；DNA復制后存在多種修復機制進一步保證了遺傳物質的穩定性。DNA甲基化在DNA復制起始、錯配修復、細菌中寄主控制的修飾與限制以及轉座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩定性發揮著重要的作用。成都bisulfite甲基化重測序分析DNA 甲基化能關閉某些基因的活性，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。

DNA甲基化是在DNA甲基化轉移酶(Dnmt)的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的過程，剛被發現時被定義為第五種堿基，實際上它是一種重要的表觀遺傳學標記，在調控基因表達、維持染色質結構、基因印記、X染色體失活以及胚胎發育等生物學過程中發揮著重大的作用，獲得全基因組范圍內所有C位點的甲基化水平數據，對表觀遺傳學的時空特異性研究具有重要意義，Bisulfite甲基化測序是以新一代高通量測序平臺為基礎，結合全基因組Bisulfite處理和生物信息數據分析技術，進行低成本、高效率、高準確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。

WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變為A，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點是否發生甲基化。特點是精確度高、重復性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內的每一個C堿基的甲基化狀態；但需要的數據量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區別于DNA文庫的構建。

DNA去甲基化分為兩類：主動去甲基化（Active DNA Demethylation）和被動去甲基化（Passive DNA Demethylation）。基因組甲基化模式的形成主要依賴于主動去甲基化，主要涉及一類具有DNA去甲基化功能的蛋白，可能存在的五種機制a. DNA轉葡糖基酶參與的堿基切除修復（base excision repair；BER）：5-mC 由DNA 轉葡糖基酶直接去除。此途徑主要存在于植物體內，動物體內也可能存在。b.脫氨酶參與的堿基切除修復：5-mC 脫氨變成胸腺嘧啶T，形成G/T 錯配，進入BER 途徑。這一途徑主要存在于動物體中，植物體中也可能存在。c.核苷酸外切修復機制（nucleotide excision repair；NER）：直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化：發生氧化反應打開碳-碳鍵，直接去除甲基基團。e.水解去甲基化：水解胞嘧啶的甲基基團，使其以甲醇的形式被釋放。DNA被動去甲基化是指當DNMTs活性被抑制或濃度過低時，無法維持原有的甲基化狀態，使DNA甲基化程度降低的過程，這類去甲基化通常發生在細胞復制的兩個周期之間，涉及到某些可與DNMTs結合的因子，其結合后形成的復合物可以阻止DNMTs與DNA的結合。目標區域甲基化重測序（Hi-Methylseq）結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術。天津甲基化重測序報告

目標區域甲基化重測序（Hi-MethylSeq），又叫重亞硫酸鹽擴增子測序。安徽多重PCR技術甲基化重測序怎么解決

DNA（主要是CpG的）甲基化是其遺傳機制和表型效應**為明確的表觀遺傳性機制。DNA甲基化譜式的變化不僅指導在正常發育過程中細胞譜系特化所依據的基因組轉錄譜式的改變，且在疾病發生和發展的基因表達異化中起著決定性的作用。為了高效準確的分析基因組中所有的甲基化位點，可采用全基因組甲基化（Whole Genome Bisulfite Sequence，WGBS）。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一，包括基于序列、熔化溫度和交互的分析，WGBS是通過重亞硫酸氫鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶（C）脫氨基轉變為尿嘧啶（U），而甲基化的胞嘧啶保持不變，再經PCR將U轉變為T，結合NGS便可高效準確地分析基因組中所有甲基化位點。安徽多重PCR技術甲基化重測序怎么解決

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