亞硫酸氫鈉修飾后測(cè)序法是一種對(duì)DNA進(jìn)行亞硫酸氫鈉處理、聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增與DNA測(cè)序相結(jié)合的方法，能夠提供測(cè)定區(qū)域的序列信息，準(zhǔn)確定位甲基化胞嘧啶位點(diǎn)；重亞硫酸鹽修飾后，甲基化胞嘧啶保持不變，但非甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ琍CR擴(kuò)增后為胸腺嘧啶，其將甲基化狀態(tài)的差異轉(zhuǎn)化成堿基的差異，從而對(duì)胞嘧啶的甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析；但在亞硫酸鈉處理的酸性環(huán)境下，單鏈特異性PCR模板穩(wěn)定性下降，容易降解；并且模板鏈CG二核苷酸水平高易形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)，常出現(xiàn)非特異性條帶，結(jié)合“巢式PCR法”能明顯提高擴(kuò)增的特異度。全基因組DNA甲基化測(cè)序是用 Bisulfite 處理DNA序列。天津目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序公司

亞硫酸氫鹽測(cè)序法用亞硫酸氫鈉對(duì) DNA 進(jìn)行化學(xué)處理會(huì)使甲基化特異性序列變異，從而可以通過(guò)NGS進(jìn)行定位和量化，主要的DNA甲基化數(shù)據(jù)分析流程：獲得DNA甲基化數(shù)據(jù)之后，首先，需要對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和質(zhì)量的基本控制，包括原始測(cè)序和芯片數(shù)據(jù)的讀取、轉(zhuǎn)換到產(chǎn)生準(zhǔn)確的DNA甲基化圖譜；其次，需要對(duì)DNA甲基化位點(diǎn)的結(jié)果進(jìn)行可視化，并且利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法鑒定樣本特異性差異的DNA甲基化位點(diǎn)；第三，驗(yàn)證 DNA 甲基化差異位點(diǎn)，并且對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)解釋。江蘇甲基化重測(cè)序機(jī)構(gòu)以MethlyC-seq為例，將DNA段化后收集特定長(zhǎng)度的片段并修復(fù)DNA末端.

DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因+表達(dá)。在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，這常見(jiàn)于基因的5'-CG-3'序列。大多數(shù)脊椎動(dòng)物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5’端的非編碼區(qū)，并成簇存在。甲基化位點(diǎn)可隨DNA的復(fù)制而遺傳，因?yàn)镈NA復(fù)制后，甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要形式，甲基化模式的異常促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，參與tumour演進(jìn)。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型，一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化，基因組不穩(wěn)定性增加；另一方面啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化，引起抑cancer基因及錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)沉默，導(dǎo)致tumour的發(fā)生。研究表明，基因組的低甲基化隨著細(xì)胞惡性度的增加而愈加明顯，是病情診斷的重要指標(biāo)；此外，CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細(xì)胞惡變之前，能在早期預(yù)測(cè)tumour的發(fā)生，其也能有效地預(yù)測(cè)tumour的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此，檢測(cè)tumour發(fā)生中相關(guān)基因的甲基化模式具有重要意義，現(xiàn)就近年來(lái)中外文獻(xiàn)報(bào)道的甲基化檢測(cè)方法進(jìn)行簡(jiǎn)要的分析總結(jié)。Hi-MethylSeq在研究DNA甲基化時(shí)，每一個(gè)read都相當(dāng)于克隆測(cè)序時(shí)的一個(gè)單克隆。

WGBS能為基因組DNA甲基化時(shí)空特異性修飾的研究提供重要技術(shù)支持，能廣泛應(yīng)用在個(gè)體發(fā)育、衰老和疾病等生命過(guò)程的機(jī)制研究中，也是各物種甲基化圖譜研究的優(yōu)先方法。常規(guī)全基因組甲基化測(cè)序技術(shù)通過(guò)T4-DNA連接酶，在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列，連接產(chǎn)物通過(guò)重亞硫酸鹽處理將未甲基化修飾的胞嘧啶C轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏，進(jìn)而通過(guò)接頭序列介導(dǎo)的 PCR 技術(shù)將尿嘧啶U轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵汆奏。上海翼和是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位，上海市****，至今已有十六年的歷史。目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序（Hi-MethylSeq），又叫重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序。南京目標(biāo)區(qū)段甲基化重測(cè)序機(jī)構(gòu)

DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine)作為甲基供體.天津目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序公司

DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的常見(jiàn)機(jī)制。啟動(dòng)子區(qū)域的高度甲基化可導(dǎo)致基因表達(dá)改變。甲基化多發(fā)生于胞嘧啶（cytosine, C）位置。在細(xì)胞和組織分化、疾病發(fā)生以及適應(yīng)環(huán)境等過(guò)程中，甲基化狀態(tài)可發(fā)生改變。高精確度全基因組甲基化修飾狀態(tài)的分析，將為發(fā)育、育種、tumour標(biāo)志物鑒定或藥物靶標(biāo)尋找等研究奠定基礎(chǔ)。全基因組甲基化測(cè)序結(jié)合了亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（bisulfite conversion）方法與新一代高通量測(cè)序技術(shù)，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測(cè)全基因組DNA甲基化狀態(tài)。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴(kuò)增所需片段，則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序，與參考序列比對(duì)，即可判斷CpG/CHG/CHH位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。天津目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序公司

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