Hi-Methylseq結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術，可實現多區段、多位點的甲基化精確定量分析，適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。采用翼和自主知識產權的多重PCR捕獲技術，確保目的片段有效富集，經亞硫酸氫鹽處理后，DNA序列復雜度嚴重降低，嚴格控制建庫PCR的循環數，降低非特異性擴增，通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基，然后將測序reads比對到轉換后的參考序列上，針對每一個CpG位點，統計C和T堿基的讀數（類似于SNP calling），來判斷該位點的甲基化。亞硫酸氫鹽處理能夠將基因組中未發生甲基化的C堿基轉換成U，進行PCR擴增后變成T。江蘇目標區段甲基化重測序哪個公司做

亞硫酸氫鈉修飾后測序法是一種對DNA進行亞硫酸氫鈉處理、聚合酶鏈反應擴增與DNA測序相結合的方法，能夠提供測定區域的序列信息，準確定位甲基化胞嘧啶位點；重亞硫酸鹽修飾后，甲基化胞嘧啶保持不變，但非甲基化胞嘧啶轉變為尿嘧啶，PCR擴增后為胸腺嘧啶，其將甲基化狀態的差異轉化成堿基的差異，從而對胞嘧啶的甲基化狀態進行分析；但在亞硫酸鈉處理的酸性環境下，單鏈特異性PCR模板穩定性下降，容易降解；并且模板鏈CG二核苷酸水平高易形成復雜的二級結構，常出現非特異性條帶，結合“巢式PCR法”能明顯提高擴增的特異度。上海目標區間甲基化重測序報告DNA甲基化是指針對DNA序列上的CpG島，由甲基化轉移酶將S腺苷甲硫氨酸的甲基轉移給胞嘧啶。

目標區域甲基化重測序（Hi-MethylSeq），又叫重亞硫酸鹽擴增子測序（Bisulfite Amplicon Sequencing， BSAS）。在前期全基因組甲基化測序、全基因組甲基化芯片等工作基礎上，或者依據文獻報道目的基因甲基化與性狀/疾病關聯，選擇感興趣的目的區間或候選基因，利用Hi-MethylSeq技術對大規模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。Hi-MethylSeq技術通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產物進行高通量測序，利用生物信息學方法，精確定量計算目標區間內的甲基化位點的甲基化狀態，在完成目標區域檢測的同時大幅降低研究費用。

DNA甲基化一般是指DNA復制后，在DNA甲基轉移酶的作用下，將S-腺甘酰甲硫氨酸分子上的甲基轉移到DNA分子中胞嘧啶殘基的第5位碳原子上，形成5-甲基胞嘧啶的過程，它是真核細胞生物基因組重要的修飾方式之一。DNA甲基化包括從頭甲基化和維持甲基化2種模式。從頭甲基化是指在從未發生甲基化的位點上發生甲基化修飾，建立DNA甲基化的過程；而維持甲基化是指維持甲基化的酶可識別新合成的半甲基化雙鏈DNA，并將甲基添加到新鏈的非甲基化胞嘧啶上。DNA甲基化是在DNA甲基化轉移（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉變為5'甲基胞嘧啶。

DNA甲基化是表觀遺傳修飾的主要方式，能在不改變DNA序列的前提下，改變遺傳表現。為外遺傳編碼（epigenetic code）的一部分，是一種外遺傳機制。DNA甲基化過程會使甲基添加到DNA分子上，例如在胞嘧啶環的5'碳上：這種5'方向的DNA甲基化方式可見於所有脊椎動物。在人類細胞內，大約有1%的DNA堿基受到了甲基化。在成熟體細胞組織中，DNA甲基化一般發生於CpG雙核苷酸（CpG dinucleotide）部位；而非CpG甲基化則於胚胎干細胞中較為常見。植物體內胞嘧啶的甲基化則可分為對稱的CpG（或CpNpG），或是不對稱的CpNpNp形式（C與G是堿基；p是磷酸根；N指的是任意的核苷酸）。特定胞嘧碇受甲基化的情形，可利用亞硫酸鹽定序（bisulfite sequencing）方式測定。DNA甲基化可能使基因沉默化，進而使其失去功能。此外，也有一些生物體內不存在DNA甲基化作用。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區別于DNA文庫的構建。杭州目標區域甲基化重測序哪里好

目標區域甲基化重測序（Hi-Methylseq）結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術。江蘇目標區段甲基化重測序哪個公司做

DNA甲基化是表觀遺傳調控的常見機制。啟動子區域的高度甲基化可導致基因表達改變。甲基化多發生于胞嘧啶（cytosine, C）位置。在細胞和組織分化、疾病發生以及適應環境等過程中，甲基化狀態可發生改變。高精確度全基因組甲基化修飾狀態的分析，將為發育、育種、tumour標志物鑒定或藥物靶標尋找等研究奠定基礎。全基因組甲基化測序結合了亞硫酸氫鹽轉化（bisulfite conversion）方法與新一代高通量測序技術，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測全基因組DNA甲基化狀態。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴增所需片段，則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶。對PCR產物進行高通量測序，與參考序列比對，即可判斷CpG/CHG/CHH位點是否發生甲基化。江蘇目標區段甲基化重測序哪個公司做

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