DNA 甲基化是早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA 甲基化能關(guān)閉某些基因的活性,去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鳥嘌呤。原核生物中CCA/TGG和GATC常被甲基化,而真核生物中甲基化發(fā)生于胞嘧啶。DNA 的甲基化是在DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?'甲基胞嘧啶。這種DNA 修飾方式并沒有改變基因序列,但是它調(diào)控了基因的表達(dá)。Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測序技術(shù),可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析。天津甲基化重測序機(jī)構(gòu)
DNA甲基化是在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(Dnmt)的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的過程,剛被發(fā)現(xiàn)時被定義為第五種堿基,實際上它是一種重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記,在調(diào)控基因表達(dá)、維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、基因印記、X染色體失活以及胚胎發(fā)育等生物學(xué)過程中發(fā)揮著重大的作用,獲得全基因組范圍內(nèi)所有C位點的甲基化水平數(shù)據(jù),對表觀遺傳學(xué)的時空特異性研究具有重要意義,Bisulfite甲基化測序是以新一代高通量測序平臺為基礎(chǔ),結(jié)合全基因組Bisulfite處理和生物信息數(shù)據(jù)分析技術(shù),進(jìn)行低成本、高效率、高準(zhǔn)確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。河南目標(biāo)區(qū)域甲基化重測序準(zhǔn)確度高全基因組甲基化測序:利用Bisulfite(亞硫酸鹽)對基因組進(jìn)行處理后上機(jī)測序。
DNA甲基化是DNA化學(xué)修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG兩個核苷酸中的胞嘧啶被選擇性地添加甲基基團(tuán)的化學(xué)修飾現(xiàn)象,極常見的是在胞嘧啶的5號碳位置,在酶和底物的作用下,引入一個甲基基團(tuán),變成了5甲基胞嘧啶(5mC),從而改變了它的活性。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細(xì)胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生,起著至關(guān)重要的作用。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用PCR擴(kuò)增目的片段,并結(jié)合二代測序平臺(illumina等主流測序平臺)并對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序,本方案目標(biāo)區(qū)域甲基化測序服務(wù)Hi-MethylSeq,在完成目標(biāo)區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費(fèi)用。
DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學(xué)修飾的一種形式,能在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表觀。 DNA甲基化在維持細(xì)胞正常功能、傳遞基因組印記,胚胎發(fā)育、tumour發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用,目前已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的研究熱點。DNA甲基化測序可在全基因組水平上比較大限度的、完整的獲取甲基化狀態(tài)信息和與基因表達(dá)調(diào)控的多重關(guān)系,可高效精確完成全基因組甲基化測序及*分辨DNA甲基化譜式繪制,并可對發(fā)現(xiàn)的靶點區(qū)進(jìn)行甲基化特異性PCR驗證。在前期全基因組甲基化測序等工作基礎(chǔ)上,利用Hi-MethylSeq技術(shù)對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測。
Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測序技術(shù),可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析,適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。采用翼和自主知識產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術(shù),確保目的片段有效富集,經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后,DNA序列復(fù)雜度嚴(yán)重降低,嚴(yán)格控制建庫PCR的循環(huán)數(shù),降低非特異性擴(kuò)增,通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基,然后將測序reads比對到轉(zhuǎn)換后的參考序列上,針對每一個CpG位點,統(tǒng)計C和T堿基的讀數(shù)(類似于SNP calling),來判斷該位點的甲基化。5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC)是一種常見的DNA修飾類型,能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。亞硫酸鹽甲基化重測序怎么解決
亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一。天津甲基化重測序機(jī)構(gòu)
DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會影響DNA結(jié)構(gòu),進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄,引起基因沉默。DNA甲基化為非編碼區(qū)(如內(nèi)含子等)的長期沉默提供了一種有效的抑制機(jī)制。基因啟動區(qū)域內(nèi)CpG位點的甲基化通過三種方式影響基因轉(zhuǎn)錄活性:DNA序列甲基化直接阻礙轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合;甲基CpG結(jié)合蛋白結(jié)合到甲基化CpG位點與其他轉(zhuǎn)錄抑制因子相互作用;染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的凝集阻礙了轉(zhuǎn)錄因子與其調(diào)控序列的結(jié)合。天津甲基化重測序機(jī)構(gòu)
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