如何知道細(xì)胞系是否發(fā)生交叉污染了?如果存在細(xì)胞系之間發(fā)生交叉污染,而且鑒定用的細(xì)胞可能有兩種以上的細(xì)胞系時(shí),那么在進(jìn)行STR位點(diǎn)檢測(cè)的時(shí)候,多個(gè)位點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號(hào)強(qiáng)度,理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此,存在交叉污染的混合細(xì)胞系中,其中一個(gè)位點(diǎn)中某些峰會(huì)明顯高于其他的峰,其中大峰是屬于混合細(xì)胞系中那個(gè)主要細(xì)胞系,而小峰則屬于那個(gè)次要細(xì)胞系。STR鑒定目前已被ICLAC、ATCC等機(jī)構(gòu)作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞鑒定,越來(lái)越多的雜志要求在投稿時(shí)提供細(xì)胞STR分型數(shù)據(jù)。常見的細(xì)胞系除了發(fā)現(xiàn)種屬內(nèi)的交叉污染/錯(cuò)誤鑒定,還有部分細(xì)胞系被發(fā)現(xiàn)連種屬都被錯(cuò)誤鑒定了!浙江小鼠細(xì)胞STR鑒定周期
這是一個(gè)比較悲慘、充滿黑色幽默的故事,其教訓(xùn)也是深刻的。在2001年,科學(xué)家在一篇論文里報(bào)道了一株新建立的大鼠(rat)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞系(留個(gè)印象是大鼠來(lái)源的),命名為RGC-5。在隨后的十幾年時(shí)間里,至少230篇論文的研究與假設(shè)是建立在這株細(xì)胞系上。這株細(xì)胞系有很多好的地方,它是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞系,對(duì)于眼科學(xué)的研究有一株大鼠的永生細(xì)胞很重要。一批有名的科學(xué)家在此基礎(chǔ)上做出很多重大發(fā)現(xiàn),論文發(fā)表在諸如PNAS之類的雜志上,特別是與青光眼有關(guān)的領(lǐng)域(你如果是這個(gè)領(lǐng)域的,要當(dāng)心了)。杭州細(xì)胞鑒定公司一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后,細(xì)胞系可以通過(guò)定期的檢測(cè),以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。
翼和公司的近交系小鼠檢測(cè)方案1.0與2.0版本(1)基于PCR-LDR的近交系小鼠檢測(cè)方案1.0版本:該版本基于經(jīng)典的PCR-LDR方案,由東華大學(xué)、中科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心、上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心多位**聯(lián)合開發(fā),并發(fā)表于《中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)》。上海翼和進(jìn)行二次開發(fā)后,推出市場(chǎng),檢測(cè)位點(diǎn)48個(gè),分布于所有染色體上,能滿足小鼠遺傳背景基本需求。(2)基于多重PCR與二代測(cè)序的近交系小鼠檢測(cè)方案2.0版本:2017年,上海翼和公司在多重PCR技術(shù)開發(fā)成熟的基礎(chǔ)上,針對(duì)近交系小鼠,設(shè)計(jì)了100多個(gè)位點(diǎn)的二代測(cè)序方案,并在Ion Proton與IlluminaX-10上分別對(duì)數(shù)百只小鼠成功鑒定。
國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量檢測(cè)現(xiàn)狀?反觀國(guó)內(nèi),遺傳質(zhì)量檢測(cè)的研究多處于較低水平,其中以STR為遺傳標(biāo)記有10多篇、以RAPD標(biāo)記或DNA指紋圖譜有9篇,固相雜交的有2篇,以SNP標(biāo)記只有2篇,表明我國(guó)各小鼠飼養(yǎng)單位對(duì)于DNA遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法的掌握較為薄弱,無(wú)論在技術(shù)上還是人才儲(chǔ)備上均落后于世界其他國(guó)家。因此,在國(guó)內(nèi)要推廣使用實(shí)驗(yàn)小鼠DNA遺傳質(zhì)量檢測(cè),一套行之有效的SNP遺傳監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)亟待建立與規(guī)范。第1,國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司的近交系與Jackson Lab數(shù)據(jù)不符。無(wú)論是從翼和公司檢測(cè)結(jié)果,還是合作對(duì)方發(fā)表論文顯示,國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存在與Jackson Lab標(biāo)準(zhǔn)近交系小鼠基因型不符合的現(xiàn)象。上海翼和應(yīng)用生物,作為老牌的細(xì)胞STR鑒定服務(wù)公司,十年以上基因分型經(jīng)驗(yàn),可以幫你解決你的疑惑。
細(xì)胞支原體檢測(cè):在細(xì)胞研究領(lǐng)域,支原體是臭名昭著的污染源,許多實(shí)驗(yàn)室都深受其害。支原體感ran能在不知不覺中干擾研究結(jié)果,浪費(fèi)大量的資金投入。上海翼和生物推出細(xì)胞支原體檢測(cè)服務(wù),特異性擴(kuò)增高度保守的支原體16S rRNA序列,可以用于檢測(cè)非常普遍的支原體種類,并且不會(huì)受真核細(xì)胞或細(xì)菌DNA干擾。翼和服務(wù)與產(chǎn)品簡(jiǎn)介:上海翼和生物是國(guó)內(nèi)比較早一批開展細(xì)胞系STR遺傳質(zhì)量鑒定服務(wù)的公司,迄今為止已有五年的細(xì)胞STR鑒定服務(wù)經(jīng)驗(yàn),十余年的STR分型經(jīng)驗(yàn)。2018年,翼和細(xì)胞STR鑒定產(chǎn)品線的用戶發(fā)表近20篇高水平SCI論文(表1),其中包括EMBO Mol Med,Cancer Res,Mol Cancer,elife等前列期刊,5分以上的文章12篇。細(xì)胞系鑒定目前主要基于國(guó)際身份認(rèn)證委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)。鄭州細(xì)胞鑒定分析
一般說(shuō)來(lái),匹配度≥80%即可認(rèn)為該細(xì)胞系正確,匹配度<80%則說(shuō)明該細(xì)胞系的來(lái)源需要被懷疑。浙江小鼠細(xì)胞STR鑒定周期
STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)基因位點(diǎn)由長(zhǎng)度為3~7個(gè)堿基對(duì)的短串連重復(fù)序列組成,這些重復(fù)序列普遍存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標(biāo)記,被稱為細(xì)胞的DNA指紋。STR已被普遍應(yīng)用于親子鑒定、個(gè)體識(shí)別、司法鑒定、交通事故鑒定、(造血干細(xì)胞)移植醫(yī)治后嵌合情況監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。STR基因座位上的等位基因可通過(guò)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)重復(fù)序列的拷貝數(shù)的不同來(lái)區(qū)分,在毛細(xì)管電泳分離之后可通過(guò)熒光檢測(cè)來(lái)識(shí)別,隨后通過(guò)一定的計(jì)算方法,即可根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與專業(yè)的細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)從而推算出樣品所屬的細(xì)胞系或可能的交叉污染的細(xì)胞系名稱。浙江小鼠細(xì)胞STR鑒定周期
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司總部位于龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502,是一家第三方檢測(cè)服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評(píng)估;大健康檢測(cè);遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測(cè)技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點(diǎn)突變檢測(cè);細(xì)胞端粒長(zhǎng)度和端粒酶活性檢測(cè)。的公司。公司自創(chuàng)立以來(lái),投身于細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù),是醫(yī)藥健康的主力軍。翼和生物始終以本分踏實(shí)的精神和必勝的信念,影響并帶動(dòng)團(tuán)隊(duì)取得成功。翼和生物創(chuàng)始人陳燁,始終關(guān)注客戶,創(chuàng)新科技,竭誠(chéng)為客戶提供良好的服務(wù)。