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河南多重PCR技術(shù)甲基化重測(cè)序分析

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-17

DNA甲基化主要發(fā)生在啟動(dòng)子區(qū)CPG島,在調(diào)節(jié)基因表達(dá)和其他功能方面起著關(guān)鍵作用.異常的DNA甲基化可參與調(diào)控疾病相關(guān)的分子信號(hào)通路,從而影響其正常功能。DNA甲基化在生物個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育與繁殖過程中,維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。細(xì)胞采用多種機(jī)制來保證DNA復(fù)制的忠實(shí)性,如DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)與半保留復(fù)制模式為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定提供了物質(zhì)基礎(chǔ);DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外還具有5’到3’的核酸外切酶活性,可及時(shí)去除錯(cuò)配摻人的堿基;DNA復(fù)制后存在多種修復(fù)機(jī)制進(jìn)一步保證了遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性。DNA甲基化在DNA復(fù)制起始、錯(cuò)配修復(fù)、細(xì)菌中寄主控制的修飾與限制以及轉(zhuǎn)座子的失活等過程中對(duì)維持遺傳信息的穩(wěn)定性發(fā)揮著重要的作用。表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對(duì)于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響。河南多重PCR技術(shù)甲基化重測(cè)序分析

目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序(Hi-MethylSeq),又叫重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS)。在前期全基因組甲基化測(cè)序、全基因組甲基化芯片等工作基礎(chǔ)上,或者依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道目的基因甲基化與性狀/疾病關(guān)聯(lián),選擇感興趣的目的區(qū)間或候選基因,利用Hi-MethylSeq技術(shù)對(duì)大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測(cè)。Hi-MethylSeq技術(shù)通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴(kuò)增目的片段,添加barcode和測(cè)序通用接頭,在Illumina X10二代測(cè)序平臺(tái)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序,利用生物信息學(xué)方法,精確定量計(jì)算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點(diǎn)的甲基化狀態(tài),在完成目標(biāo)區(qū)域檢測(cè)的同時(shí)大幅降低研究費(fèi)用。成都甲基化重測(cè)序分析DNA復(fù)制后胞嘧啶的甲基化會(huì)改變DNA的構(gòu)象,使DNA的大溝無法與DNA結(jié)合蛋白正常結(jié)合。

DNA甲基化是DNA化學(xué)修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG兩個(gè)核苷酸中的胞嘧啶被選擇性地添加甲基基團(tuán)的化學(xué)修飾現(xiàn)象,極常見的是在胞嘧啶的5號(hào)碳位置,在酶和底物的作用下,引入一個(gè)甲基基團(tuán),變成了5甲基胞嘧啶(5mC),從而改變了它的活性。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對(duì)于維持正常細(xì)胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生,起著至關(guān)重要的作用。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用PCR擴(kuò)增目的片段,并結(jié)合二代測(cè)序平臺(tái)(illumina等主流測(cè)序平臺(tái))并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,本方案目標(biāo)區(qū)域甲基化測(cè)序服務(wù)Hi-MethylSeq,在完成目標(biāo)區(qū)域檢測(cè)的同時(shí)大幅降低研究費(fèi)用。

在生物系統(tǒng)內(nèi),甲基化是經(jīng)酶催化的,這種甲基化涉及重金屬修飾、基因表達(dá)的調(diào)控、蛋白質(zhì)功能的調(diào)節(jié)以及核糖核酸(RNA)加工。重金屬修飾可以在生物系統(tǒng)外發(fā)生。組織樣本的化學(xué)甲基化也是組織染色的方法之一。表觀遺傳學(xué)的甲基化包括DNA甲基化或蛋白質(zhì)甲基化。1)DNA甲基化。脊椎動(dòng)物的DNA甲基化一般發(fā)生在CpG位點(diǎn)(胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤位點(diǎn),即DNA序列中胞嘧啶后緊連鳥嘌呤的位點(diǎn))。經(jīng)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為5-甲基胞嘧啶。人類基因中約80%-90%的CpG位點(diǎn)已被甲基化,但是在某些特定區(qū)域,如富含胞嘧啶和鳥嘌呤的CpG島則未被甲基化。這與包含所有普遍表達(dá)基因在內(nèi)的56%的哺乳動(dòng)物基因中的啟動(dòng)子有關(guān)。1%-2%的人類基因組是CpG群,并且CpG甲基化與轉(zhuǎn)錄活性成反比。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上,是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子。

DNA甲基化作為一種重要的表觀修飾,在調(diào)控基因的時(shí)空特異性表達(dá)中扮演著關(guān)鍵的角色,參與了X染色體失活、基因組印記和重復(fù)序列抑制等諸多生命過程。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA甲基化主要發(fā)生在CpG二核苷酸對(duì)的C(胞嘧啶)上,并在有絲分裂過程中得以相對(duì)穩(wěn)定的維持,這對(duì)細(xì)胞保持譜系特性有著重要的意義。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的Hi-MethylSeq技術(shù),可對(duì)對(duì)大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測(cè)。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位。目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序(Hi-MethylSeq),又叫重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序。安徽目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序分析

甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測(cè)序法.河南多重PCR技術(shù)甲基化重測(cè)序分析

DNA甲基化是**早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化*發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá),去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。脊椎動(dòng)物DNA的甲基化狀態(tài)與生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控密切相關(guān),比如在tumour發(fā)生時(shí),抑cancer基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態(tài),導(dǎo)致抑cancer基因表達(dá)的下降。河南多重PCR技術(shù)甲基化重測(cè)序分析

上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司致力于醫(yī)藥健康,是一家服務(wù)型的公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù)等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司注重以質(zhì)量為中心,以服務(wù)為理念,秉持誠(chéng)信為本的理念,打造醫(yī)藥健康良好品牌。翼和生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念,全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。

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