本發明涉及細胞生物學領域,特別涉及一種血小板裂解液的制備方法及其應用,用于替代動物來源的血清,為間充質干細胞擴增和生產提供的營養。該制備方法包括:將血小板在20~24℃振蕩保存1~5d,采用反復凍融法和超聲法進行處理,離心,收集上清液,去除纖維蛋白,獲得血小板裂解液.本發明提供的血小板裂解液的制備方法可明顯提高血小板裂解液中細胞因子含量,且可進行細胞因子的定量平衡,有利于減少產品批間的差異,可達到穩定的促進人源性細胞生長的作用。血小板裂解物是由富含血小板的血漿純化萃取而成,其中包含很多不同的細胞生長因子。AB血清替代品血小板裂解液使用注意事項血小板裂解液解凍后請立即進行培養基的配制,配置好的培...
Sexton致力于為細胞和基因zhi liao行業提供解決方案,以改善客戶實驗結果和降低風險。兩款人源血小板裂解液Stemulate和nLivenPR(通過病原體減少PR技術處理以進一步降低風險)為用戶提供了一種可用于生產多種細胞類型的偉大方案。如果需要大批量生產使用,我們的專有工藝確保每個批次都提供安全一致的產品。也許由于血小板中蛋白表達的性質與血液生物化學固有的可變性質,對多個批次的Stemulate和Nliven評估表明,關鍵因子的蛋白濃度高度一致(如圖3所示的Stemulate中的EGF水平)。這種產品批次之間的一致性會明顯降低MSCs制造過程中性能差異。血小板裂解液(platelet...
在解凍的ELAREM Prime血小板裂解液中可能會形成不溶性顆粒。顆粒形成不會影響細胞培養性能。如果完全細胞培養基中出現凝結或不溶性顆粒,建議在ELAREM Prime血小板裂解液在基礎培養基中稀釋后使用0.22μm過濾器過濾完全培養基。過濾不會影響細胞生長性能(經過MSC測試)。但是,不建議對100%濃縮的ELAREM Prime血小板裂解液進行過濾。避免多次凍融循環ELAREM Prime血小板裂解液,可以很大限度地減少微粒的形成。無菌性ELAREM Prime血小板裂解液經過無菌處理。微生物培養測試為陰性。質量控制測試在經過認證的測試實驗室進行。血小板裂解液的血源從哪里來?Compa...
Sexton公司為用戶提供了研究級和臨床級人血小板裂解液,并且具有行業先進的批次到批次一致性,用戶可以放心的從早期研究和開發到齊全的臨床生產去使用Sexton的人血小板裂解液。根據額外的標準和更嚴格的要求發布使用的臨床級材料,經過與研究級hPL相同的制造工藝獲得臨床級人血小板裂解液。這使得用戶可以輕松地從研究過渡到臨床材料,而無需在驗證上花費額外的成本和時間??傊?,在開發的早期階段通過優化合適的試劑可無縫過渡到后期臨床生產。首先,考慮輔助材料的關鍵屬性及其對制造工藝的后續影響,無論是從生物和功效的角度,還是從總生產成本和商業的角度,都需要為用戶的工藝選擇正確的原材料。Sexton公司通過Ste...
Sextonh的PL血小板裂解液產品接收時處于干冰運輸的冷凍狀態。收到hPL產品后,建議客戶立即將產品儲存在-20°C的環境中。Sexton有數據支持運輸期間短時間的干冰保存對產品性能(包括pH值、滲透壓、總蛋白和細胞生長)沒有顯著影響。Sexton hPL產品的解凍應按照Sexton產品說明文件中的建議使用37°C水浴進行。Sexton不建議使用4°C冰箱或室溫解凍方法,因為這些做法尚未經過測試或作為任何內部驗證的一部分。已知使用冰箱或室溫解凍會導致更高水平的纖維蛋白/纖維蛋白原碎片,并可能導致產品性能下降。37°C水浴是Sexton用于所有批次放行測試的內部解凍方法,也是與Sexton h...
血小板裂解液主要成分為人血小板裂解液,含有較高濃度的生長因子等細胞培養必須物質,在體外細胞培養和細胞zhiliao中可代替胎牛血清和自體血清。人源血小板裂解液就是直接將人類來源血小板細胞經過連續的反復凍融裂解后,進一步提純這些血小板脫顆粒的商品。血小板裂解液(platelet lysate,PL)是自體或異體血小板富集物經細胞裂解后的產物,已經被諸多研究推薦作為胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的替代品,應用于間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)的大規模擴增培養。 血小板裂解液真的能替代胎牛血清?干細胞培養血小板裂解液使用比例為了排除肝...
本課題在體外分離、培養和鑒定人牙髓干細胞、牙周膜干細胞及根尖牙rutou干細胞的基礎上,通過比較體內、外不同培養模式下,血小板裂解液對這三種牙源性干細胞增殖及分化的影響,以期找到PL應用于牙源性干細胞培養、誘導分化的較好方式,為研究相關機制及組織工程應用提供實驗基礎,同時為將來PL在臨床zhiliao方面的應用提供新的思路。結果如下。1.牙髓干細胞、根尖牙rutou干細胞和牙周膜干細胞的分離、培養和鑒定使用酶消化法或組織塊法分離獲得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs,利用有限稀釋法克隆化培養以純化傳代細胞;采用免疫細胞染色及流式細胞儀鑒定細胞STRO-1等表型,確定所獲細胞的...
該實驗的目的是對比單**小板裂解液與乏血小板血漿對成纖維細胞及在促進傷口愈合的作用。方法概述如下:單**小板制備血小板裂解液和乏血小板血漿,用于大鼠原代皮膚成纖維細胞,以5%或者10%的濃度處理細胞,24 h之后檢測細胞增殖率,細胞周期,并且使用Transwell方法檢測細胞遷移.取皮器建立大鼠皮膚缺損模型,分別以血小板凝膠,血漿和生理鹽水處理傷口,2d換藥,8d后計算傷口愈合率,石蠟切片HE染色,Q-PCR方法分析不同愈合組織的差異。人源血小板裂解物的細胞增殖速度,明顯大于添加胎牛血清或添加AB血清的實驗組。gamma射線輻照血小板裂解液廠家本發明涉及細胞生物學領域,特別涉及一種血小板裂解液...
那么經常有客戶會問道人血小板裂解液中的肝素的使用濃度到底如何抉擇呢?添加培養之前有必要花時間來優化下這個肝素濃度參數嗎?現在小編通過比較了不同濃度的普通肝素(unfractionatedheparinUFH,分子量3000-30000Da)和低分子肝素(LMWH-分子量2000-12000Da)在hPL培養基中培養MSCs的增殖能力、成纖維細胞體外集落形成單位(colony-formingunit,CFU-F)、免疫表型和體外分化等情況,給大家作解答。從而幫助大家正確使用血小板裂解液。血小板裂解物是無菌過濾的黃色澄清溶液,來自于多人份健康人血小板,裂解后經無菌過濾制備而成。GMP等級血小板裂解...
Sexton的血小板裂解液系列產品使用干冰運輸,全程確保產品處于凍存狀態。接收后立即儲存在-20°C環境中,使用的時候必須使用37°C水浴解凍,而非4°C冰箱或室溫解凍方法,否則會產生更多碎片,影響性能。對于不立即使用的整瓶/袋解凍的血小板裂解液產品,建議將剩余體積制備成一次性使用的等分試樣。在滿足生物血清相容性和低溫要求的條件下,可以使用錐形管或較小的瓶子進行等分儲存。等分試樣的制備將減少血小板裂解液產品的冷凍/解凍循環。 血小板裂解液的制備方法是什么?制備血小板裂解液品牌比較細胞培養基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREM Prime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2....
由于在臨床中對血小板單元的需求而供體有限,因此使用新鮮的血小板單元來產生血小板裂解液引起了關注。過期的血小板單位可能是另一種來源,因為有證據表明可以使用從過期單位獲得的血小板而不會影響終產品的質量。在一個擁有380萬居民的意大利地區,2014年生產了大約100,000個來自單一捐贈者的血沉棕黃層單位。其中約60%在有效期后被丟棄??紤]到50ml的平均血沉棕黃層體積,使用過期的血沉棕黃層單位可以生產約3000L的血小板裂解液。血小板裂解液中的沉淀在使用前需要過濾掉么?FBS替代品血小板裂解液COA Sexton的血小板裂解液的血小板來源于美國FDA注冊、AABB認證的美國血庫。單位必須在過期前...
nLivenPR是一種細胞培養基補充劑人血小板裂解液產品,可作為生長因子的來源,代謝物和其他支持細胞生長的生物活性分子,對間充質干細胞,T細胞的擴增均有明顯的促進作用,并且介導T細胞體內的存活和殺傷作用。產品說明書將提供的信息包括產品的基本信息,如存儲條件、成分和體積。nLivenPR只在體外使用,不作為藥物成分。nLiven PR在市場上沒有任何臨床聲明或適應癥。Sexton公司沒有禁止將nLivenPR用作制造細胞(生物)材料的輔助材料擬用于臨床的產品。 GMP級血小板裂解物產品在嚴格的GMP條件下生產和分裝。NK細胞培養血小板裂解液市場報價現在咱們已經了解到肝素對于血小板裂解液使用濃...
現在咱們已經了解到肝素對于血小板裂解液使用濃度優化的必要性,小編繼續福利大放送,現給大家帶來德國PL Bioscience公司的ELAREM系列的高性價比人源血小板裂解物,據說有不到千元便可買到50ml的XENO-FREEN無動物源MSCs細胞培養補充劑hPL,用戶根據自己的實驗需求選擇需要添加肝素版本和不需要添加肝素版本。并且考慮到用戶從科研到臨床的過渡需求,我們曼博生物為各位用戶提供各種研究級、GMP/臨床級的hPL以支持學術研究、工業生產以及體外診斷行業中的細胞擴增應用。用血液里的血小板濃縮物反復冷凍/解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。正規進口血小板裂解液的方法Sexton致力于為細...
細胞培養基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREM Prime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREM Prime血小板裂解液添加到基礎培養基(即MEMα、GlutaMAX補充劑、無核苷)和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細胞培養基。3.應在完全細胞培養基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mL PL SUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or 0.024mg/mL PL SUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細胞培養基可在4°C下儲存,并穩定約4周儲存和穩定性ELAREM Prime...
Sexton的血小板裂解液的血小板來源于美國FDA注冊、AABB認證的美國血庫。單位必須在過期前接受異體輸血。血小板捐獻者接受捐贈前進行徹底篩查和檢測,以降低輸血傳播gan ran的風險,根據21CFR610和AABB血庫和輸血服務標準。這個篩查首先是對捐贈者的總體健康狀況進行評估,包括對捐贈者的身體狀況進行評估體溫和高危行為指標(如腸外用藥證據)。那么捐贈者是誰呢?詢問了一系列問題以確定輸血傳播gan ran的風險,如旅行史,先前或當前疾病,以及描述家庭、同居者和性關系的病史合伙人。相關的輸血傳播gan ran由美國FDA鑒定,包括人類gan ran免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(...
血小板裂解液(plateletlysate,PL)是自體或異體血小板富集物經細胞裂解后的產物,已經被諸多研究推薦作為胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)的替代品,應用于間充質干細胞(mesenchymalstemcells,MSC)的大規模擴增培養。但是,PL對諸如牙髓干細胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)、牙周膜干細胞(periodontalligamentstemcells,PDLSCs)及根尖牙rutou干細胞(stemcellsfromapicalpapilla,SCAP)等牙源性干細胞的生物學效應尚不明確。 人源血小板裂解物是一種能有...
MSCs在添加10% 血小板裂解液和不同濃度肝素的培養基中培養7天,隨后使用MTT法評估增殖。脂肪組織源性間充質干細胞(AT-MSC)和骨髓源性間充質干細胞(BM-MSC)培養的過程中,如果使用的UFH濃度低于0.61 IU/mL或者使用Enoxaparin(LMWH)濃度低于0.024 mg/mL (2.4 IU/mL) 時培養液均呈現凝膠狀態(灰色背景),而肝素濃度過高則對細胞增殖的負面影響明顯且以劑量依賴的方式提高。備注肝素濃度單位換算:肝素濃度國際單位(IU)衡量,1IU國際單位是指在規定的條件下,將1ml全血延長凝血3分鐘所需的量:1mg大約相當于100IU的肝素。血小板裂解液的血源...
細胞培養基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREM Prime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREM Prime血小板裂解液添加到基礎培養基(即MEMα、GlutaMAX補充劑、無核苷)和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細胞培養基。3.應在完全細胞培養基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mL PL SUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or 0.024mg/mL PL SUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細胞培養基可在4°C下儲存,并穩定約4周儲存和穩定性ELAREM Prime...
解凍后的血小板裂解液在4°C的保存時間不建議超過24小時,否則會影響性能Sexton進行了內部研究,以檢查保存在4°C冷藏溫度下的解凍hPL的穩定性。對Stemulate和nLivenPR都進行了檢查,以確定解凍的產品在4°C下可以儲存多長時間,然后才會影響性能和放行指標。根據結果,不建議在添加到基礎培養基之前將解凍的hPL產品在4°C冰箱中儲存超過24小時。數據表明,在初始解凍后在4°C下儲存超過24小時時,滲透壓和生長性能會發生統計學上的顯著變化。雖然結果在解凍后5天內仍處于合格參數指標范圍內,但建議盡快使用該產品,以減少使用之間的差異以及和COA上的偏差。血小板裂解液的制備方法是什么?T...
安全信息遵循安全數據表(SDS)中概述的操作說明。穿戴適當的護目鏡、衣物和手套。ELAREM Prime血小板裂解液由從EMA許可的血液中心的健康捐贈者那里獲得的血小板單位制造。獻血者已根據歐盟現行的獻血者資格標準指南獲得資格。注意:盡管進行了所有測試,但必須對潛在傳染源采取適當的安全預防措施。所有人類血液制品都應按照目前可接受的生物安全實踐和預防血源病毒gan ran的指南進行處理。只能用于科研用途,不可用于zhi liao或診斷用途。 血小板裂解液中的沉淀在使用前需要過濾掉么?制備血小板裂解液有效期多久相比之下,我們開發了一個專有的制造工藝,使我們的血小板裂解液可使用電子束處理。重要的...
MSCs是異質性的細胞群,其組成可能受培養條件的影響。血小板裂解液中肝素及其濃度高低對細胞形態和生長模式并未有明顯的影響。通過免疫熒光顯微鏡分析未發現波形蛋白(一種通常在中胚層起源的細胞中表達的中間絲)和α-SMA表達的差異,肝素濃度對于α-SMA(綠色)和波形蛋白(紅色)的分布并無影響。脂肪組織源性間充質干細胞(AT-MSC)和骨髓源性間充質干細胞(BM-MSC)本身免疫表型就是相似的,經添加不同濃度肝素的血小板裂解液培養擴增的AT-MSC和BM-MSC的流式細胞分析結果顯示出CD29、CD73、CD90和CD105表達,而表面標記CD14、CD31、CD34和CD45的缺失,可見肝素濃度對...
為了排除肝素對于細胞增長的抑制作用可能與防腐劑(這里采用芐醇作為防腐劑添加到UFH或LMWH中)有關。我們對不添加防腐劑的肝素進行了相同實驗,結果對AT-MSC和BM-MSC細胞增殖抑制趨勢相同。在隨后的傳代培養到3代中的累積的群體中,兩種肝素UFH和LMWH對MSC增殖的影響也變得明顯,血小板裂解液中肝素濃度較低時累積細胞群體倍增指數(cPD) 較高。CFU-F的塑料粘附生長性能是MSCs培養的先決條件,在96孔板中通過有限稀釋的方法結合泊松統計進行CFU-F試驗,顯示集落形成率CFU-F在高濃度UFH時中度降低,而在高濃度Enoxaparin(LMWH)時明顯降低。這些結果表明高濃度的LM...
細胞zhi liao的生產是一項費時又昂貴的工程。優化生產工藝通常會涉及優化培養參數去減少時間、降低成本,同時提供呈現預期療效的表型。細胞增長所需的培養基補充劑也是整個細胞生產工藝中的一個較關鍵的因素。胎牛血清(FBS)一直以來被作為是細胞培養的常用補充劑,但因涉及倫理和安全問題,如今從加工過的血液中提取的人源培養基補充劑已經得到越來越多的使用。血小板因其在血栓形成中的作用而聞名,很近,血小板被認為是傷口部位再生過程的關鍵介質。血小板裂解過程中釋放的生長因子和細胞因子可調節局部免疫應答,并啟動局部組織的加速恢復(圖1)??紤]到血小板在人類生物學中這些作用,也就不難理解為什么處理過的血小板裂解液...
血小板中含有很多不同的細胞生長因子,包括PDGF,VEGF,EGF等,實踐證明,血小板分泌的細胞生長因子能夠對多種細胞起到支持生長的作用,可以完全替代胎牛血清(FBS)甚至于在支持一些細胞培養的效果上優于FBS。本產品是將多人份濃縮血小板混合后裂解而成,產品均一性好,經過了嚴格安全性有效性質量檢控。人血小板裂解液能夠支持包括間充質干細胞成骨分化,成脂分化,造血干細胞以及誘導性多能干細胞的生長等。是這些細胞公認的動物源血清替代品。血小板裂解液為什么要使用肝素?Elitecell血小板裂解液的主要成分在解凍的ELAREM Prime血小板裂解液中可能會形成不溶性顆粒。顆粒形成不會影響細胞培養性能。...
間充質間質細胞(MSCs)體外擴增的培養基一般添加胎牛血清FBS,但是考慮到異種ganran及免疫反應的風險,監管機構并不鼓勵使用。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應或牛病原體ganran的風險,有助于增強間充質干細胞的擴增,也相對容易地根據良好的生產規范程序生產,并已用于臨床應用,因此現如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴增MSCs一種非常有效的FBS替代方法(參考文獻1)。 血小板裂解液由血漿組成,含有纖維蛋白原和凝血因子,對于一般細胞培養中涉及的含鈣培養基來說通常需要加入抗凝劑(常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等)來防止凝膠形成,其中肝素很為常用...
建立商業化細胞生產的比較好培養基體系需要PD科學家考慮各種各樣的變量,性能,來源、質量、可用性、法規等。作為歷史上占主導地位的細胞生長補充劑和組織培養,胎牛血清(FBS),有著眾所周知的作用限制(動物源性、價格波動、道德)具有挑戰性等),導致使用人源性補充劑,如血小板裂解物(hPL)和AB人血清(ABS)。人源資源的使用衍生材料并非沒有風險和制造商必須使用適當的策略來管理和減輕這些風險。安全是首要原則。應使用符合倫理的原材料來源生產的產品。血小板裂解液里面的沉淀對細胞有影響嗎?臨床用血小板裂解液廠家 前述所說的生長因子大多存在于血小板內部的α顆粒中,當血小板被活化后會產生脫顆粒作用(即血小板...
我們的PR過程旨在限制輻照對血小板裂解液性能的影響,并經過驗證以提供有效性的客觀證據。許多常見的去除和滅活方法,如巴氏殺菌,納濾和溶劑/洗滌劑工藝去除或破壞產品功效所需的生長因子和蛋白質,或留下可能影響產品質量的殘留物。電子束和γ射線輻照的作用機理與電離輻射對核酸的損傷機理相同,通常用于醫療和食品的輻照。 我們的研究表明,伽馬射線照射可以有效的病毒滅活,但導致大量生長因子、不良產品的損失特征(渾濁)和總體減少細胞擴增的水平。其他步驟,如添加蛋白質穩定劑通常用于對抗但這些效應,但需要額外的表征并會引入有關風險的新問題。 血小板裂解液和胎牛血清,各自有利弊,只是這些年大家對血小板裂解物的...
為了排除肝素對于細胞增長的抑制作用可能與防腐劑(這里采用芐醇作為防腐劑添加到UFH或LMWH中)有關。我們對不添加防腐劑的肝素進行了相同實驗,結果對AT-MSC和BM-MSC細胞增殖抑制趨勢相同。在隨后的傳代培養到3代中的累積的群體中,兩種肝素UFH和LMWH對MSC增殖的影響也變得明顯,血小板裂解液中肝素濃度較低時累積細胞群體倍增指數(cPD) 較高。CFU-F的塑料粘附生長性能是MSCs培養的先決條件,在96孔板中通過有限稀釋的方法結合泊松統計進行CFU-F試驗,顯示集落形成率CFU-F在高濃度UFH時中度降低,而在高濃度Enoxaparin(LMWH)時明顯降低。這些結果表明高濃度的LM...
我們的PR過程旨在限制輻照對血小板裂解液性能的影響,并經過驗證以提供有效性的客觀證據。許多常見的去除和滅活方法,如巴氏殺菌,納濾和溶劑/洗滌劑工藝去除或破壞產品功效所需的生長因子和蛋白質,或留下可能影響產品質量的殘留物。電子束和γ射線輻照的作用機理與電離輻射對核酸的損傷機理相同,通常用于醫療和食品的輻照。 我們的研究表明,伽馬射線照射可以有效的病毒滅活,但導致大量生長因子、不良產品的損失特征(渾濁)和總體減少細胞擴增的水平。其他步驟,如添加蛋白質穩定劑通常用于對抗但這些效應,但需要額外的表征并會引入有關風險的新問題。 血小板裂解液在使用前一定要了解其使用方法。Sigma血小板裂解液官...
本課題在體外分離、培養和鑒定人牙髓干細胞、牙周膜干細胞及根尖牙rutou干細胞的基礎上,通過比較體內、外不同培養模式下,血小板裂解液對這三種牙源性干細胞增殖及分化的影響,以期找到PL應用于牙源性干細胞培養、誘導分化的較好方式,為研究相關機制及組織工程應用提供實驗基礎,同時為將來PL在臨床zhiliao方面的應用提供新的思路。結果如下。1.牙髓干細胞、根尖牙rutou干細胞和牙周膜干細胞的分離、培養和鑒定使用酶消化法或組織塊法分離獲得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs,利用有限稀釋法克隆化培養以純化傳代細胞;采用免疫細胞染色及流式細胞儀鑒定細胞STRO-1等表型,確定所獲細胞的...