LAMP法，即環介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification），是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學者Notomi于2000年開發。LAMP法檢測有以下特性：
快速高效：LAMP技術可以在1小時內把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^～10^10^拷貝，擴增效率高。
簡便性：LAMP技術不需要進行模板的預變性，減少了PCR技術升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求，同時擴增效率高，可以在較短時間內完成檢測。
LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經濟等優點，已經應用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉基因產品檢測等領域，并且還將廣泛應用于臨床診斷、環境監測、食源安全等領域，具有更為廣闊的發展應用前景。
細胞培養過程中支原體污染怎么預防？細胞支原體檢測試劑廠家
支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基。在細胞培養中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養法篩選培養基。
此外，支原體檢測的培養基推薦使用支原體肉湯培養基和精氨酸支原體肉湯培養基等，這些培養基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上。
因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基，具體取決于檢測的目的和方法。
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支原體的預防可通過以下方式：
1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。
2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。
3. 使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。
4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防和細胞培養箱水盤預防等，以預防支原體污染。
6. 提高實驗室人員對支原體污染的認識：通過科普教育和培訓，提高實驗室人員對支原體污染的認識和預防意識。
7. 建立嚴格的實驗室管理規程：制定并執行嚴格的實驗室管理規程，包括樣本處理、廢物處理、設備維護等，以降低支原體污染的風險。
細胞培養中支原體污染會對實驗結果產生多方面的影響，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢，甚至停滯。
2. 細胞形態改變：支原體感*的細胞可能會出現形態的改變，如細胞體積增大、形態不規則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細胞產物改變：支原體感*可能影響細胞產生的蛋白質、細胞因子等生物活性物質的表達和分泌。
5. 實驗結果不準確：支原體污染會干擾實驗結果的準確性，導致實驗數據不可靠。
6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養批次間差異大，影響實驗的重復性。
7. 影響后續實驗：支原體污染的細胞培養產物用于后續實驗，如轉染、基因編輯等，可能會影響實驗效果。
8. 影響細胞培養產物的質量：支原體污染會影響細胞培養產物的質量，如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復實驗。
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支原體污染是細胞培養中普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養：支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖
02/ 改變蛋白質、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導和形態
04/ 損害膜和細胞器
05/ 導致突變和染色體變化
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失：支原體的污染會導致嚴重的經濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結果的不可靠性
08/ 生物安全問題
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細胞培養中支原體預防措施。細胞支原體檢測試劑廠家
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方法
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靈敏度
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優勢
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劣勢
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培養法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標準
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ü 費勞力
ü 耗時長
ü 需要特定的培養基
ü 特定支原體種類需要特定的培養基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
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ü 費時
ü 需要細胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀，易判讀結果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價格略高
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ü 可檢測的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費勞力
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生物發光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結果
ü 無法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實驗操作時間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
細胞支原體檢測試劑廠家
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