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外泌體在肺病進程中的作用:肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長。據相關報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調節基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進一些病癥血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,有研究發現,外泌體中的內容物可以觸發上皮-間質轉化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現EMT,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現增殖,遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍合肥正規外泌體提取試劑單價在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。
外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調節性T細胞,壓制機體的抗一些病癥免疫反應;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,從而導致一些病癥的生長和轉移。在肺病的侵襲和轉移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色。據有關報道稱,NSCLC分泌的外泌體內TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關。此外,啟動的T細胞可以通過調控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,進而促進肺病的轉移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物。
外泌體(exosome)是所有細胞釋放出的細菌大小的顆粒。它們天然地存在于血液中。根據來自美國德州大學MD安德森一些疾病中心的一項新的研究,對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學系研究員RaghuKalluri博士。在這項新的研究中,經過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發揮作用,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內遷移和進入靶細胞(包括病細胞)中。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現外泌體的提取分離。
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后。天津正規外泌體提取試劑廠家現貨
外泌體提取:用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。廣州外泌體提取試劑服務電話
外泌體的提取、分離方法:開發高效、快速、穩定,并且保持外泌體結構和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應用于臨床的基礎和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,但是外泌體的純度和產量卻和分離方法息息相關。通常分離步驟少、產率高,但是純度會受到影響。鑒于每種分離方法都有其優缺點,實驗可以根據樣本來源、下游實驗目的等,選擇合適的外泌體分離方法。2015年,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產量都難滿足實驗的需求。因此,推薦聯合使用各種方法,從而得到高純度和高產量的外泌體。廣州外泌體提取試劑服務電話
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