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來源: 發(fā)布時間:2023-11-21

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項及常見問題解答:1、培養(yǎng)基的選擇依細(xì)胞種類而定。如果是從別的實驗室借來的細(xì)胞,較初階段一定要保持細(xì)胞原有的培養(yǎng)條件;特殊種類的細(xì)胞,比如內(nèi)皮細(xì)胞,可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件,添加一些特定成分。2、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏。小六兒見過有的大實驗室細(xì)胞量多,一次性購買的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多,有些人可能覺得-20冰箱保存時間會更久一些。但是經(jīng)過冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化,顏色變深,這就是培養(yǎng)基的PH值升高了。3、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺,用來合成細(xì)胞生長所需要的核酸和蛋白質(zhì)。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定,保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺。所以盡量不要大批量購買培養(yǎng),也不要一次配太多的培養(yǎng)基。原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時,它們之間會互相影響。蕪湖正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家

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原代細(xì)胞的獲取:1.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法,取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間,期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法,在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細(xì)胞的生長狀況,需觀察其是否貼壁,是否污染,組織塊法要觀察是否有細(xì)胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細(xì)胞狀態(tài)判斷正常貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后,會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底,有的呈纖維狀,有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細(xì)胞圖(左:小鼠成纖維細(xì)胞;右:雞胚成纖維細(xì)胞;下:人成纖維細(xì)胞)石家莊原代細(xì)胞分離試劑盒廠家供應(yīng)永生化細(xì)胞系通常具有更快的倍增時間并可持續(xù)地分裂。

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原代細(xì)胞培養(yǎng)之取材:取材作為原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中的靠前部至關(guān)重要,以下幾種取材技術(shù),你都用過哪些方法呢?各類組織取材,操作及注意事項:1.皮膚和粘膜主要取皮片,面積一般2~4平方厘米。2.內(nèi)臟和實體瘤:1)無菌環(huán)境;2)熟悉所需組織的類型和部位;3)要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結(jié)締組織。3.血液細(xì)胞一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞,取材時應(yīng)注意抗凝。4.骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞嚴(yán)格無菌,注意抗凝,還要盡快分離培養(yǎng),離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。

原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng):由于每種原代細(xì)胞培養(yǎng)的條件迥異,而且每個實驗室都摸索出自己的培養(yǎng)條件,而對于一個特定的組織塊,所用培養(yǎng)條件不一樣,得出的所需細(xì)胞族群就不一樣,因為每種組織塊都含有不同種類的細(xì)胞群,而每一種細(xì)胞群在所選定的培養(yǎng)條件下(比如所選蛋白分解酶的種類和條件,細(xì)胞因子的種類,基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時間長短)都會得出不同的結(jié)果。由于各實驗室采取不同的培養(yǎng)條件,即使是同一塊心組織就有可能造成A實驗室獲得30%的心肌細(xì)胞,70%其他種類細(xì)胞,而B實驗室卻能獲得70%所需心肌細(xì)胞,30%為成纖維、脂肪等種類。這樣的話,即使是做同一項目的實驗,就有可能得出相反的科學(xué)結(jié)論。因此,早在2004年,美國科學(xué)界就質(zhì)疑之前以原代細(xì)胞為主的科研文章,并同時提出原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)的概念將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。

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細(xì)胞傳代的方法都有哪些:根據(jù)不同的細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代;部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打即可傳代;懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打。原代培養(yǎng)的開始傳代應(yīng)注意的問題?細(xì)胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前,不要急于傳代;原代培養(yǎng)時細(xì)胞多為混雜生長,不同的細(xì)胞有不同的消化時間,因此要根據(jù)需要注意觀察及時處理,并根據(jù)不同細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受時間而分離和純化所需要的細(xì)胞;吹打細(xì)胞時動作要輕巧盡可能減少對細(xì)胞的損傷;開始傳代時細(xì)胞接種數(shù)量要多一些,使細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境而利于細(xì)胞生存和增值加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。蘇州正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒哪家便宜

原代內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長因子。蕪湖正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家

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