外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。外泌體提取:可分離到大小相近的囊泡顆粒。開封正規外泌體提取試劑進貨價
所有的細胞都能分泌外泌體,但是不同細胞分泌的外泌體不管在數量上還是在內含物中都具有很大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進一些病癥發生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體相關數據庫有哪些?lexoRBase數據庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數據庫匯總了不同囊泡研究中發現的蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。lExoCarta數據庫主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個物種的286個研究結果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。貴陽正規外泌體提取試劑廠家直銷由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質。
外泌體相關miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調或壓制靶mRNAs來調節轉錄水平上的基因表達,目前非編碼RNA被普遍發現存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復合物與多個mRNA結合,從而阻滯整個生物通路。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環游離miRNA的表達,與75例健康者相比,發現了兩種高表達的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估,結果顯示,12個一些病癥相關的miRNA*在肺病患者中過度表達。Cazzoli等收集了30個血漿樣本,發現4種外泌體miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明顯升高,用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積(AUC)為0.908。
2018版《指導要求》說明外泌體沒有限定單一的分離手段,多種手段都可以進行細胞外囊泡的富集。《指導要求》編寫者們認為“高回收率,低特異性”的富集手段是指那些富集囊泡的同時會有大量的非囊泡組分被富集,甚至細胞的整個分泌組都會被摻入其中,歸入這一類的分離手段主要包括通過改變電荷或通過高聚物作用的沉淀試劑盒、低分子量截流的超濾分離、超長時間和超高離心力的超速離心等。Wako的MagCapture?ExosomeIsolationKitPS(產品編號299-77603(2tests),293-77601(10tests)),使用PS親和法對外泌體進行提取,損失小且能獲得高純度的外泌體。外泌體的提取分離:密度梯度離心。
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態、雙層膜結構,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。包括瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞(免疫細胞、神經細胞、干細胞),都可以產生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,也可運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細胞器進入受體細胞,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發揮關鍵作用,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標記物,也能作為靶向藥物的載體進行疾病利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。昆明外泌體提取試劑廠家現貨
聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀。開封正規外泌體提取試劑進貨價
研究中研究人員發現,胃病細胞周圍富含TAM。TAM以M2極化表型為特征,并促進胃病細胞在體外和體內的遷移。此外,研究人員發現M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動。通過使用質譜方法,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質,是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅動因素。然而,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內對胃病細胞的遷移沒有顯著影響。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉移,促進細胞骨架的遷移。總的來說,該研究發現外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉移到一些病癥細胞,促進了胃病細胞的遷移。開封正規外泌體提取試劑進貨價