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來源: 發布時間:2025-07-01

外泌體,是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發現,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發現點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發現外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體的提取方法:超濾離心。杭州外泌體提取試劑推薦廠家

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大量關于一些病癥相關巨噬細胞的研究表明,一些病癥相關巨噬細胞通過與一些病癥細胞進行細胞間通訊,與一些病癥進展和轉移相關,然而對TAM與一些病癥細胞之間通信的研究限制于可溶性因子,例如促炎細胞因子,其中包括趨化因子、炎癥因子和生長因子等。較近的研究證據表明,外泌體是一些病癥微環境中不同細胞類型之間的重要通訊媒介。外泌體將信息從一個細胞傳遞到另一個細胞并重編程受體細胞。目前大部分研究都集中在一些病癥細胞分泌的外泌體,關于TAM衍生的外泌體及其對治病細胞的影響知之甚少。TAM具有兩種相反的表型:M1亞型巨噬細胞具有抗一些病癥作用,M2型巨噬細胞具有致瘤作用活性。TAM的表型由特定的一些病癥來源的趨化因子和外泌體調節。較近的一項研究表明,一些病癥來源的外泌體miRNA調節一些病癥促進M2巨噬細胞的極化。然而,TAM衍生的外泌體對一些病癥進展和轉移的調節尚未明確定義。目前,TAM的外泌體概況仍然大部分未知,并且TAM衍生的外泌體對于一些病癥進展在功能上是否必需還未確定。上海正規外泌體提取試劑價格外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細胞液中快速提取的。

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外泌體的提取、分離方法:超高速離心法。常用的是超高速離心法,該方法是被譽為分離外泌體的“金標準”。該方法利用離心力從細胞培養液或生物流體獲得外泌體,經過400×g、2000×g、10000×g的低速離心,除去細胞及大的細胞分泌物;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12]。超高速離心因操作簡單,不需要復雜的技術支持,并且成本相對較低而被普遍使用。但是該方法耗時、產率低,得到的外泌體的數量和質量很大程度上受轉子的類型、轉子沉降角度等因素影響,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會有其他的囊泡、蛋白質或蛋白和RNA的聚集體。

外泌體的提取分離:1、超速離心法(差速離心)。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行(如圖所示),可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2、密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。

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外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,可通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成多泡內涵體,內涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,其中包含RNA、蛋白質、microRNA、DN**段等多種物質,存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發現至今已有30多年的歷史,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞。如今,研究已經發現外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、一些病癥細胞發生的發展、神經細胞信號轉導過程中都發揮著重要作用。專利申請利用分離培養人尿液來源細胞并收集培養基來進行體外培養。將人尿液來源細胞的培養基通過0.22微米濾膜過濾,以去除大的細胞殘片以及其它雜質。杭州外泌體提取試劑推薦廠家

人尿液來源細胞的外泌體的獲取方法,是首先分離培養人尿液來源細胞并收集培養基。杭州外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態,含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,經水浴、反復輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養基于消化液中,混勻,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。杭州外泌體提取試劑推薦廠家

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