如果您正在或者準(zhǔn)備或者計(jì)劃開(kāi)展外泌體研究,歡迎加入我們的外泌體小課堂。首先,來(lái)個(gè)自我介紹:(實(shí)物照)品牌背景FUJIFILMWako前身為和光純藥株式會(huì)社,企業(yè),也是全球前列的試劑供應(yīng)商,在歐美都設(shè)有分公司。自成立以來(lái)一直致力于的試劑生產(chǎn)與開(kāi)發(fā),并獲得ISO9001、ISO/IEC17025、ISO14000等多項(xiàng)國(guó)際認(rèn)證。2017年被大佬FUJIFILMGroup(富士膠片集團(tuán))斥收購(gòu)(你沒(méi)看錯(cuò),就是做相機(jī)、膠卷的那個(gè)富士),更名為富士フイルム和光純薬株式會(huì)社(FUJIFILMWako)。外泌體提取試劑盒是FUJIFILMWako的明星產(chǎn)品哦,有關(guān)外泌體、如何成功獲取高質(zhì)量的外泌體等問(wèn)題,請(qǐng)跟隨勤學(xué)好問(wèn)的小和同學(xué)一起進(jìn)入外泌體小課堂,學(xué)識(shí)淵博的將一一為您解答。外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)。金華正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍。唐山外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)外泌體的提取分離:密度梯度離心。
外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類(lèi)型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來(lái)源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移。來(lái)自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血病(AML)細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來(lái)沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,以明顯降低RAS活化、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞,有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動(dòng)脈硬化。分子標(biāo)記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類(lèi)性肝炎、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升。預(yù)后標(biāo)志
大量關(guān)于一些病癥相關(guān)巨噬細(xì)胞的研究表明,一些病癥相關(guān)巨噬細(xì)胞通過(guò)與一些病癥細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞間通訊,與一些病癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān),然而對(duì)TAM與一些病癥細(xì)胞之間通信的研究限制于可溶性因子,例如促炎細(xì)胞因子,其中包括趨化因子、炎癥因子和生長(zhǎng)因子等。較近的研究證據(jù)表明,外泌體是一些病癥微環(huán)境中不同細(xì)胞類(lèi)型之間的重要通訊媒介。外泌體將信息從一個(gè)細(xì)胞傳遞到另一個(gè)細(xì)胞并重編程受體細(xì)胞。目前大部分研究都集中在一些病癥細(xì)胞分泌的外泌體,關(guān)于TAM衍生的外泌體及其對(duì)治病細(xì)胞的影響知之甚少。TAM具有兩種相反的表型:M1亞型巨噬細(xì)胞具有抗一些病癥作用,M2型巨噬細(xì)胞具有致瘤作用活性。TAM的表型由特定的一些病癥來(lái)源的趨化因子和外泌體調(diào)節(jié)。較近的一項(xiàng)研究表明,一些病癥來(lái)源的外泌體miRNA調(diào)節(jié)一些病癥促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞的極化。然而,TAM衍生的外泌體對(duì)一些病癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)尚未明確定義。目前,TAM的外泌體概況仍然大部分未知,并且TAM衍生的外泌體對(duì)于一些病癥進(jìn)展在功能上是否必需還未確定。近幾年來(lái),市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。
CD47是信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,也稱(chēng)為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號(hào),從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖,增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對(duì)細(xì)胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對(duì)細(xì)胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),CD47和病基因KRAS驅(qū)動(dòng)的胞飲作用都會(huì)壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對(duì)外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過(guò)遞送RNAi來(lái)特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實(shí)驗(yàn)PDAC小鼠模型的總生存期。由于國(guó)內(nèi)有關(guān)外泌體提取試劑的缺乏,我國(guó)對(duì)外泌體的研究還基本依賴(lài)于過(guò)程繁瑣的超速離心和進(jìn)口提取試劑盒。珠海正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜
用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):抽血技巧。金華正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細(xì)菌,現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。金華正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家