數字聚合酶鏈式反應（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術因具有高靈敏度、受基質干擾少等優勢而被廣用于轉基因食品檢測。本研究綜述了數字PCR技術的原理、系統各部件的優劣勢，梳理了數字PCR技術在轉基因檢測與溯源技術（標準物質）方面的進展和發展趨勢，以期為轉基因食品檢測領域提供參考依據。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環擴增和樣品的檢測。對于數字PCR儀器系統，各個部件之間仍然有較大的改進空間，要發揮部件之間的協同作用是很重要的，而且有持續研究的價值。表1中總結了部分常見的數字PCR系統的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。臻準推出新款數字PCR產品：AccuONE2.0數字PCR系統。廣州一體化數字PCR性能特點

全自動樣本制備系統DMX-1000配備氣流發生裝置和氣壓控制裝置，能夠實現高精度壓力控制，結合**產品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技術，DMX-1000可以在70秒內快速、穩定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴數量可達2萬-60萬個，粒徑范圍30-120μm，性能穩定。除此之外，銳訊還提供微流控芯片的定制服務，以滿足不同的液滴數目和尺寸要求。平板式快速擴增儀TC-1000，不再使用傳統的96孔板，而是特制的液滴擴增芯片；不再是傳統的“燒開水”加熱模式，代之以平板式單液滴層均勻受熱的方式。在這樣的改進之下，TC-1000完成40個PCR循環只需約45分鐘（TC-2.0升級版更是把時間縮短到了25分鐘！），大幅縮短了等待時間，提升了實驗進度。這對實驗人員而言，無疑是莫大的福利——高效完成工作，不加班——愛工作，也愛生活。賽默飛數字PCR原理通過不同cluster的位置進行突變位點的判斷時存在誤判的現象。

數字PCR實驗步驟包括：1）試劑配制：將10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探針、無核酸酶水混合成dPCR預混液，并分裝到8聯排管中或96孔板中；將各待測樣本的核酸模板、陽性對照、陰性對照分別加入相應的8聯排管中或96孔板中；2）芯片進樣：在小海龜BioDigital·青全自動樣品處理系統上進行芯片上反應液進樣和液滴生成；3）芯片擴增：在小海龜BioDigital·青PCR擴增儀上進行芯片上PCR擴增反應；4）芯片閱讀：在小海龜BioDigital·青生物芯片閱讀儀上進行芯片上熒光信號閱讀；5）數據分析：使用生物芯片數據分析·青軟件進行數據分析和報告導出；

數字PCR技術的出現不是為了完全取代原有分子診斷技術，而是更好的補充和完善現有技術平臺。數字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面。國產數字PCR企業在商業化應用方面，也不斷“攻城略地”。數字PCR作為當下靈敏的核酸檢測技術，盡管目前國產數字PCR企業異軍突起，在臨床市場中實現了彎道超車，但未來仍然需要聚焦客戶需求，不斷夯實底層創新，同時在檢測成本、自動化、試劑盒申報注冊、出海國際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國際局勢，波譎云詭。在百年未有之大變局，實現中華民族的偉大復興，需要國內企業瞄準技術高地，以爭分奪秒的精神，解決技術"卡脖子"的難題，不斷攻堅克難，自主創新，在與國際品牌的同臺競技中，彰顯中國實力。數字PCR應用前景廣闊，可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創產前篩查、測序結果驗證等領域。

產物越短，往往擴增效率越高。模板二級結構（Templatesecondarystructure）：PCR變性中和變性后的單鏈DNA不夠穩定，容易自發折疊形成二級結構。應避免可形成穩定二級結構的模板鏈區域，因為如果模板鏈形成的二級結構在退火溫度下穩定存在，定位在模板鏈二級結構處的引物將無法同模板鏈相結合。使用mfold可預測引物待結合的區域是否存在復雜的二級結構。設計引物時，盡量使引物定位在模板二級結構以外的序列上。避免具有4個以上相同的連續堿基的區域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸階段聚合酶“滑動（PolymeraseSlippage）”。選擇GC含量（GCContent）在50-60%之間的區域。如果高GC含量區域不可避免，可以嘗試提高退火溫度，并使用添加劑，例如甘油，數字PCR主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法。廣州一體化數字PCR性能特點

模板 DNA 量越多，熒光達到域值的循環數越少，即 Ct 值越小。廣州一體化數字PCR性能特點

數字PCR技術是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術。該技術將一個樣本分成幾到幾十萬份，分配到不同的反應單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板)，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增；擴增結束后，將有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，終根據泊松分布原理以及陽性微滴的比例，計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數。定量：不再依賴于Ct值和標準曲線，直接給出靶序列的起始濃度，實現真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性：數字PCR可實現萬分之一稀有樣本的定量，可用于極微量核酸樣本檢測、復雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。數字PCR在分子診斷領域將會發揮巨大的作用，數字PCR適用于生物標志物研究、拷貝數變異分析、微生物檢測、轉基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等，并對遺傳病、、產前診斷的研究提供了一種全新的技術思路與手段，具有廣的、不可替代的應用前景。廣州一體化數字PCR性能特點

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