在遺傳學上,一般是通過染色體的數量來確定植物的倍性,隨著科技的發展,目前植物倍性鑒定有多種方法。在形態學層次上,觀察不同倍體植株的形態特征的差異,可間接確定植株的倍性,但準確性不夠高,而且要在植株生長發育的特定時期才能鑒定,往往難以及時采取染色體加倍措施,致使育種材料不能得到及時利用,故常不被采用。在分子生物學層次上,利用流式細胞儀測定植物基因組DNA含量,即C值的大小,也可直接確定再生植株的倍性。由于該方法所用的儀器設備昂貴,普通實驗室難以具備,故制約了該方法的應用和推廣。在細胞學層次上,有染色體計數直接鑒定方法和葉片保衛細胞葉綠體計數間接鑒定法。染色體計數法準確、可靠,但費時而且需要熟練的細胞學操作技術。流式細胞儀主要由流動室及液流系統、激光器及光學系統、光電管及檢測系統、計算機及分析系統組成。華南地區智能型倍性分析儀細胞周期檢測
樣品上樣到儀器 典型的實驗從單細胞懸浮液中的熒光標記細胞開始,但是可以使用任何顆粒類型的樣品。將樣品置于流式細胞儀上,樣品被吸到儀器中,細胞懸浮在一種被稱為鞘液的生理緩沖液。流體系統(管道、泵和閥)將初始樣品懸浮液排列成單列細胞流,并使細胞通過流式細胞儀以進行分析。流式細胞儀的流體學。流動池(也稱為流式小室)使樣品中的細胞(顆粒)排成一列。這是單細胞分析的關鍵步驟。激光檢測點 細胞與激光發生相互作用的地方稱為激光檢測點。您也可能聽過它的另一個名字“激光攔截”。這是熒光檢測發生的地方。當激光束照射到單個細胞時,一些光會撞到細胞內的物理結構,導致光線散射。這種光散射可被測量,并且與相對細胞大小和細胞內的結構相關。這些測量稱為前向角散射(FSC)和側角散射(SSC),取決于收集光的位置相對于激光路徑的角度。幾乎同時,來自激光器的光激發與細胞相關的所有熒光團,產生熒光發射。所有這些光被檢測器收集并通過流式細胞儀的電子元件進行處理。通過激光檢測點之后,流體系統會將不需要的細胞輸送到廢液桶中。在細胞分選儀中,細胞將在激光檢測點被分選和輸送到收集管中,以供后續實驗使用。中國配備532nm光源倍性分析儀生命科學用品CyFlow Analyser倍性分析儀靈活便捷:結構緊湊,便于移動,適用于多種工作場所。
細胞核DNA含量和基因組大小對于研究生物的多樣性至關重要,尤其是在基礎植物學和應用植物學等多個研究領域。這些研究的基礎是細胞的內多倍化(即C值)。細胞的內多倍化**了細胞核內DNA含量倍增,指的是同一個體內相鄰體細胞具有多種倍性的細胞核現象,由細胞內復制產生。細胞內多倍化在真核生物中普遍存在,尤其在植物中變化范圍較大,對研究個體的生長發育具有重要的生物學意義。盡管C值非常重要,但是目前已知C值的植物品種*占所有植物品種的一小部分。基于流式的檢測技術簡單、快速、準確、可靠,目前該技術已作為測定植物勻漿中C值的優先方法,并且在植物學中的應用越來越范圍廣。
待測細胞被制備成單細胞懸液,經特異性熒光染料染色后置于專門樣品管中,在氣體壓力推動下被壓入流動室,流動室內充滿鞘液(不含細胞或微粒的緩沖液),在高壓作用下從鞘液管噴出包裹細胞,使細胞排成單列形成細胞液柱,依次通過檢測區。液柱與高度聚焦的激光束垂直相交,被熒光染料染色的細胞受到激光激發產生熒光信號和散射光信號,這些光信號通過波長選擇的濾光片,由相應的光電管和電子檢測器接收并轉換成電信號,經放大器放大后送入計算機并進行分析顯示和結果輸出,測定的結果常用單參數直方圖、雙參數散點圖、輪廓(等高)圖和三維立體圖來表示。用熒光核酸染料標記植物中DNA含量,流式細胞儀高通量進行植物倍性分析,已成為植物研究中的常用分析手段。
植物染色體倍性鑒定在植物遺傳育種中具有十分重要的作用。在育種過程中,通過花藥(花粉小孢子)、未受精子房等途徑再生出的植株,往往是單倍體、雙單倍體及其他倍性植株的混合群體,有效的倍性鑒定是了解其遺傳背景和進一步應用的基礎。多倍體育種是植物育種的一種途徑之一,它不僅可以對性狀進行改良,還可以提高植物體內各種有效成分的含量。利用倍性鑒定,準確地辨認多倍體并將其挑選出來,也是多倍體育種中的重要環節一環。另外,倍性鑒定也可用于分析細胞分裂活動等生理和遺傳研究。倍性鑒定特別是苗期倍性鑒定,不僅可以減少育種工作量,而且可以減少土地和資金的投入。國內外關于各種鑒定方法報道不少,但較分散。本文綜述了各種倍性鑒定方法并對其優缺點進行了評選。不同倍性植株在細胞學和形態解剖學上具有明顯差異,目前主要有兩大類型直接鑒定法和間接鑒定法。倍性分析儀進行基因組大小需通過DNA嵌入染料進行化學計量染色,該染料應具有較低的DNA峰值變異系數。山東配備532nm光源倍性分析儀試劑盒
CyFlow Analyser倍性分析儀可以高分辨率DNA和基因組大小分析。華南地區智能型倍性分析儀細胞周期檢測
染色體分析傳統上通過對中期擴散進行核型分析,或通過對間期細胞或中期擴散進行熒光原位雜交 (FISH) 進行。流式細胞術在 1970 年代被引入作為分析染色體數量(倍性)和結構(端粒長度)的新方法,其數據解釋主要基于熒光強度。主要由于分析方面的挑戰,這項技術很少被人類細胞遺傳學應用所采用。成像流式細胞術的引入,以及在標準多參數流式細胞術定量工具中添加數字圖像,增加了一個新的維度。當數據只限于熒光強度時,顯示染色體和 FISH 信號的能力克服了固有的困難。這個領域現在正在向前發展,正在開發評估懸浮全細胞(正常和惡性)染色體數量和結構的方法。近的一項進展是包括免疫表型分析,這樣抗原表達可用于識別特定細胞的特定染色體及其異常。這種能力已在血*中得到證實,例如慢性淋巴細胞白血病。可實現的高靈敏度和特異性突出了流式細胞術在細胞基因組應用(即診斷和疾病監測)中的潛在成像應用。這篇綜述介紹并描述了成像流式細胞儀在人類染色體染色體分析中的發展、現狀和應用。華南地區智能型倍性分析儀細胞周期檢測
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