使用ddPCR的一個主要優點在于，定量不是相對的。微滴式數字PCR計算事件的數量，因此可以確定檢測極限和比較低起始量，以便達到所需的靈敏度。在連續監控或比較不同患者的效果時，這可以更準確地比較負荷，因為所測得的豐度不是相對的。經過實驗證實，ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能夠檢測患者cfDNA樣品中的KRAS突變（圖2）。這些患者的血漿樣品購自ConversantBio和ProMedDx，之前已通過FFPE基因分型被分為KRAS突變陽性或陰性。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學儀器有限公司。數字PCR是定量技術，基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量，是一種定量的方法。法國賽默飛數字PCR技術

數字PCR產品的發展，為不同場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在醫學檢驗方面，在 性疾病早期檢測、病癥的液體活檢、無創產前檢查等領域展現出良好的應用前景。實現 性疾病早期高效檢測——以病毒為例，有病毒檢測、和臨床樣本病毒載量評估He監測環境病毒載量；二代熒光定量PCR檢測技術是目前病毒檢測的"金標準"，但由于病毒探針結合位點突變、樣本病毒載量不足等原因，在臨床檢測過程中經常出現假陰性結果，由于數字PCR具有更高的靈敏度、精細度，以及其適合痕量樣本檢測的特性，能夠檢測出熒光定量PCR檢測過程中錯過的 ，可作為后者的補充。在人群篩查及臨床診療中，為科學選取采樣方式，需要評估不同臨床樣本病毒載量，如鼻咽拭子、血尿、糞便、肺泡灌洗液等，由于數字PCR可提供一定程度上量化指標，為采樣方法的選取提供了參考，從而提高檢出率。在外防輸入的戰略要求下，環境病毒檢測工作尤為重要，數字PCR可對低核酸豐度樣本進行有效檢測，包括從不同環境中取樣的樣本，如病房、醫院衛生間、實驗室等等，在病情防控中起到了不可忽視的作用。此外，數字PCR的應用場景還有病程不同階段的病毒載量評估、核酸參考品制備、抗病毒藥物研發等環節。廣州全自動數字PCR解決方案全自動數字PCR平臺，讓數字PCR真正邁入新時代，助推數字PCR普及應用。

產物越短，往往擴增效率越高。模板二級結構（Templatesecondarystructure）：PCR變性中和變性后的單鏈DNA不夠穩定，容易自發折疊形成二級結構。應避免可形成穩定二級結構的模板鏈區域，因為如果模板鏈形成的二級結構在退火溫度下穩定存在，定位在模板鏈二級結構處的引物將無法同模板鏈相結合。使用mfold可預測引物待結合的區域是否存在復雜的二級結構。設計引物時，盡量使引物定位在模板二級結構以外的序列上。避免具有4個以上相同的連續堿基的區域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸階段聚合酶“滑動（PolymeraseSlippage）”。選擇GC含量（GCContent）在50-60%之間的區域。如果高GC含量區域不可避免，可以嘗試提高退火溫度，并使用添加劑，例如甘油，

常規PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行定量。如何在雙通道設置及雙探針標記的情況下實現多重檢測?不同位點的雙探針檢測體系中引物和探針采用不同的終濃度，這樣陽性微滴的終點FAM/HEX熒光信號強度就會不同，利用陽性微滴不同的“分簇(cluster)”來區分不同的突變位點。采用對應的KRAS野生型和突變型細胞系對雙重ddPCR檢測體系的性能進行驗證。結果顯示除了Q61H位點外，其他位點的檢測體系在54C的情況下均能很好的區分4個明顯的cluster。楊雁峰博士堅信數字PCR是可以應用于無創產前篩查的理想技術之一，這也是他2016年創立塔歌生物的初衷。

數字PCR的引物和探針設計規則同熒光定量PCR是類似的，具體規則如下：1、查找和選擇目標序列設計引物和探針的第一步是得到感興趣基因的核酸序列。找到基因保守區域：基因的保守區域是指來自同一屬/種/亞型的、在某個基因上堿基序列差別很小或沒有差別的區域。根據需要，使用ClustalX或ClustalW等軟件對齊屬于同一屬/種/亞型的基因的一組序列，在對齊序列的保守區域設計引物，并確保引物結合位點處的保守序列與其它非待檢測的屬/種/亞型的堿基序列具有較大的差異。擴增產物長度（AmpliconLength）：可在75-200bp之間（產物長度=下游引物位置-上游引物位置+1）。在使用dPCR進行轉基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。深圳賽默飛數字PCR價格

dPCR的結果統計方式有2種，一種是采用標記多種顏色，另一種采用概率統計的數據處理方法。法國賽默飛數字PCR技術

PCR已成為分子診斷領域重要的技術手段之一，占據分子診斷市場的半壁江山。數字PCR是一代PCR技術，也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術。但數字PCR使用成本仍然相對較高，檢測靶點數少（一般≤6靶點/反應），阻礙了其在臨床中的大規模應用，提高數字PCR的多重檢測能力迫在眉睫。基于熒光通道數的增加和基于探針濃度梯度增加，均可以在一定程度上提高數字PCR檢測重數，然而只能達到"線性"增加的目的。基于探針濃度梯度的多重檢測技術雖然光'f明顯增加多重能力，但由于無法避免交叉反應現象，不能確保獲得位點特異性的分簇，因此穩定性不足、靈敏度較差，難以滿足臨床級別的數據要求。而基于創新的且數字PCR獨特適用的熒光編碼技術可以實現“指數”級的多重檢測，顛覆性的提高數字PCR檢測重數，覆蓋臨床應用多場景需求。法國賽默飛數字PCR技術

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