面對日益嚴格的限量標準和可預期降低的儀器購置成本,數字PCR將在食品檢測領域起到越來越重要的作用:同時,數字PCR技術帶來的量值的溯源方式,也將成為轉基因標準物質的主要研究方向。發展dPCR協同分析和自動化程度,使其具有更好兼容性、更低廉的成本,可使數據結果不間斷地納入到全食品安全全產業鏈中,從而在未來的食品檢測中得到更廣的應用。dPCR多重檢測可在不使用標準曲線的情況下,在同一分析過程中同時測定單一或多個轉基因與參考基因的比率,提高檢測的效率節省重復操作。從市場規模來看,目前數字PCR市場規模并不大,全球約1.5億至2.5億美元。廣州雙螺旋生物儀器數字PCR技術
基于數字PCR技術平臺,塔歌生物成功地開發了胎兒染色體非整倍體(T21,T18和T13)無創產前篩查試劑盒(數字PCR-NIPT),并已完成數百例臨床樣本驗證。數字PCR-NIPT的陽性檢出率和NGS相似,且成本接近血清學,可以在上述應急策略中取代血清學作為靈敏度和特異性更高的初篩方法,以有效提高陽性檢出率,降低需要復篩的假陽性樣本數和節省總的篩查成本。數字PCR應用前景廣闊,可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創產前篩查、測序結果驗證等領域。但目前,大多數醫院采購的數字PCR儀器是用于科研層面,在臨床應用上仍處于起步階段,未得到普遍應用。廣州雙螺旋生物儀器數字PCR技術臻準推出新款數字PCR產品:AccuONE2.0數字PCR系統。
在PCR進行的過程中,首先是引物和探針分別結合,然后開始擴增。如果一個微滴當中有目標基因的片段,Taqman探針就會被酶切碎,熒光基團和淬滅基團分離。在后面的檢測過程中,熒光基團被激發光路激發之后就會發熒光。如果沒有,Taqman探針就不會被切碎,在后面的檢測過程中,熒光基團吸收到激發光的能量,就會被淬滅基團給淬滅,那么儀器就檢測不到這個微滴的信號。檢測的過程中,并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點,這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段,在微滴當中的分布,是符合泊松分布的(也就是說進不進的概率相等,并且相互獨立)。所以,一個發光的微滴中,可能有一個或者三個四個,甚至更多個目標基因的拷貝。因此,發光的微滴數與原始的基因拷貝數并不是一對一的對應關系。
無創產前篩查有望成為數字PCR在臨床快速落地的锏應用。首先,無創產前篩查領域對于兼顧成本、準確性、速度的創新技術的需求還未滿足。其次,無創產前篩查市場空間龐大,雖說中國每年新生兒的增長速度正在放緩,但每年仍有超過1000萬的新生兒,帶來了巨大的想象空間。2022年6月,鄭大一附院遺傳與產前診斷中心、塔歌生物聯合在JournalofTranslationalMedicine(影響因子5.531)雜志上發表文章,驗證了數字PCR作為T21,T18和T13產前篩查方法的可行性,這是世界上報道在真實臨床條件下通過盲檢實現一管反應可從孕婦血漿樣本中同時檢測出T21、T18和T13的數字PCR無創產前篩查試劑盒。文章顯示,塔歌生物胎兒染色體非整倍體無創產前篩查數字PCR試劑盒總體篩查的靈敏度為100%,特異性為95.12%,均優于血清學篩查。除準確率高之外,塔歌生物的產品還擁有成本低、操作簡便,及檢測速度快等優勢,可以加速無創產前篩查在各級醫院,特別是基層地區普遍落地,助力中國出生缺陷防控。分散方式與數量由數字PCR系統決定,分散體積和結果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優化得到。
ThermoFisherQuantStudio3D是另一個經典的芯片式數字PCR平臺,其基本的檢測流程是:將反應液加入到涂布器中,通過涂布器將反應液均勻涂布在有20000個微孔的芯片上,將芯片放在PCR儀上擴增,將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號。操作較為復雜,整個過程在封閉的芯片中進行,污染的風險較低。STILLANaica是一個較新的數字PCR平臺,基本的檢測流程是:將反應液加入芯片,將芯片放入微滴生成擴增系統,生成30,000個微滴單層平鋪于芯片中,PCR擴增在芯片上完成。然后將擴增后的芯片轉移至微滴閱讀分析系統,采取拍照的方式讀取熒光信號。由于整個過程在封閉的芯片中進行,污染的風險較低。檢測結果部分為陽性,部分為陰性,之后進行分子數統計,不需做標曲。廣州雙螺旋生物儀器數字PCR分析應用
在患者術后復發檢測中,數字PCR評估出的ctDNA陽性,可以早于影像學數月提前揭示出患者復發。廣州雙螺旋生物儀器數字PCR技術
了解泊松分布,我們先要從二項式分布說起,二項式分布是一個離散概率分布,它給出了m次試驗中k次成功的可能性,每次試驗的概率為p,例如當擲骰子時,二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數字PCR的情況中,投擲骰子類似于將一個目標實體隨機“投擲”到一組分區中,當目標落在選定的分區中時,就是成功。如果有n個分區,并且分區過程是完全隨機的,則目標出現在所選分區中的概率為1/n。該試驗重復m次,樣品中的每個分子一次。如下所示的二項式分布給出了k個成功的概率,即所選分區恰好包含k個分子的概率。數字PCR通常采用大量分區。當n很大,并且嘗試成功的概率(1/n)很小時,二項分布可以近似為泊松分布。廣州雙螺旋生物儀器數字PCR技術
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是國內一家多年來專注從事數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀的老牌企業。公司位于廣州市黃埔區銳豐三街4號617房,成立于2015-04-17。公司的產品營銷網絡遍布國內各大市場。公司業務不斷豐富,主要經營的業務包括:{主營產品或行業}等多系列產品和服務。可以根據客戶需求開發出多種不同功能的產品,深受客戶的好評。公司秉承以人為本,科技創新,市場先導,和諧共贏的理念,建立一支由數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀**組成的顧問團隊,由經驗豐富的技術人員組成的研發和應用團隊。廣州雙螺旋科學儀器有限公司依托多年來完善的服務經驗、良好的服務隊伍、完善的服務網絡和強大的合作伙伴,目前已經得到精細化學品行業內客戶認可和支持,并贏得長期合作伙伴的信賴。