由于現有的商業化數字PCR設備在物理上只設置了2個檢測通道，所以存在一個明顯的短板：不能同時進行多個位點的檢測。在樣品多位點的檢測中，就需要更多的起始樣品，但臨床上組織的樣品非常有限。相比之下熒光定量PCR儀上就很容易實現多重檢測。為了考察利用數字PCR實現多重檢測的可能性，英國TheInstituteofCancerResearch的研究人員以非小細胞肺相關的KRAS基因為檢測對象，在Bio-Rad的數字PCR系統上通過3個三重ddPCR檢測體系來實現9個KRAS突變位點的檢測。數字PCR適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域。蘇州全自動數字PCR技術

數字PCR技術的出現不是為了完全取代原有分子診斷技術，而是更好的補充和完善現有技術平臺。數字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面，在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領域展現出良好的應用前景。國產數字PCR企業在商業化應用方面，也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發了一系列試劑盒，并積極推進注冊臨床試驗；領航基因聚焦在血流 （膿毒癥）及呼吸道 領域，相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒；銳訊生物聚焦于檢測，2020年其產品獲得FDA緊急授權。除此之外，在公共衛生領域，國產數字PCR企業針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等，也推出多種檢測試劑盒。廣東數字PCR解決方案使用數字PCR技術對436例非小細胞肺*樣品進行檢測，并挑選樣本驗證一致性。

Drop-off實驗包括兩個針對相同擴增子的TaqMan探針：與野生型序列互補而與突變位點不發生互補的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標雜交，產生雙重陽性信號（如圖1B，藍色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個核苷酸的突變也會阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標基因進行退火，從而得到一個陽性信號。

引物設計（DesignPrimers）：引物長度（PrimerLength）：18-25個堿基之間。短的引物更易于同靶序列結合，但過短的引物也更可能同基因組上的多個區域相結合而產生非特異性擴增產物。更長的引物會提高同靶序列結合的特異性，但過長的引物（>30bp）同靶序列結合速度變慢，降低結合率。引物長度和組成直接影響引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火溫度（AnnealingTemperatures）。引物的組成——GC%含量（GCContent）：指引物總堿基中G和C堿基數量的百分比，該值應在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高，推薦使用較高Tm值的引物。PCR本質上是將一個傳統的PCR反應分成了數萬個PCR反應。

數字PCR技術流分類目前，dPCR的基本方法都已經建立，根據反應單元的不同形式，主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統。微液滴制備的方法，目前主流的有四種：1）芯片微孔物理分割法，俗稱物理分隔法，公司有Fluidgm，Qiagen，Roche，ThermoFisher，;2）液滴分割法，俗稱油包水，代替公司有Bio-Rad;3）雜交式芯片液滴法，公司有Stilla;4）注射振動制滴法。PS：芯片式物理分割技術所有已經過期，目前有不少公司在這個技術的基礎上進行開發，例如羅氏。數字PCR的兩大應用場景在于基因檢測、無創出生缺陷篩查。蘇州銳訊數字PCR儀器

dPCR的結果統計方式有2種，一種是采用標記多種顏色，另一種采用概率統計的數據處理方法。蘇州全自動數字PCR技術

相比于qPCR，dPCR在轉基因檢測中具有以下優勢：（1）檢測靈敏度高：理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝，而實際應用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數下得到精確的結果；通常轉基因比參考基因（內源基因）濃度低很多；（2）前處理簡單且受基質成分干擾較小：dPCR反應效率和精密度受到食品基質成分干擾影響較小，可應用于混合基質樣品中低豐度DNA的檢測；（3）dPCR對抑制劑的敏感性較低：由于dPCR結果表示為“有熒光“或“無熒光”，即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光；（4）適合多重轉基因檢測：食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉基因片段，可以進行多重dPCR檢測，提高分析效率。同時，dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾，適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究，一次可識別不同的轉基因區域。下面詳細進行說明。蘇州全自動數字PCR技術

廣州雙螺旋科學儀器有限公司一直專注于儀器儀表批發;商品批發貿易（許可審批類商品除外）;商品零售貿易（許可審批類商品除外）;教學設備的研究開發;辦公設備耗材批發;生物技術開發服務;生物技術推廣服務;計算機批發;生物技術轉讓服務;農業科學研究和試驗發展;醫學研究和試驗發展;自然科學研究和試驗發展;水處理設備的研究、開發;食品科學技術研究服務;環保設備批發;辦公設備批發;，是一家精細化學品的企業，擁有自己獨立的技術體系。公司目前擁有較多的高技術人才，以不斷增強企業重點競爭力，加快企業技術創新，實現穩健生產經營。公司業務范圍主要包括：數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀等。公司奉行顧客至上、質量為本的經營宗旨，深受客戶好評。公司力求給客戶提供全數良好服務，我們相信誠實正直、開拓進取地為公司發展做正確的事情，將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經過幾年的發展，已成為數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀行業出名企業。