數字聚合酶鏈式反應（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術因具有高靈敏度、受基質干擾少等優勢而被廣用于轉基因食品檢測。本研究綜述了數字PCR技術的原理、系統各部件的優劣勢，梳理了數字PCR技術在轉基因檢測與溯源技術（標準物質）方面的進展和發展趨勢，以期為轉基因食品檢測領域提供參考依據。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環擴增和樣品的檢測。對于數字PCR儀器系統，各個部件之間仍然有較大的改進空間，要發揮部件之間的協同作用是很重要的，而且有持續研究的價值。表1中總結了部分常見的數字PCR系統的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。全自動數字PCR平臺，讓數字PCR真正邁入新時代，助推數字PCR普及應用。美國數字PCR熒光通道

作為時下的熱點技術，數字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應單元（nL，納升級別）中，使得每個反應單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎上進行擴增、檢測和分布統計，從而實現靶標分子的比較 計數。（圖：數字PCR技術原理）根據微反應單元的不同形式，數字PCR產品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數字PCR產品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統和ThermoFisher公司的QuantStudio系統等。與一、二代PCR技術相比，數字PCR具有很多優勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內參和標準曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標；三是微反應單元相互獨立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產物間的相互干擾，準確度和可重復性較高。華南地區全自動數字PCR系統臻準推出新款數字PCR產品：AccuONE2.0數字PCR系統。

dPCR的結果統計方式有2種，一種是采用標記多種顏色，通過不同檢測通道分辨不同顏色和強度，再根據分散液滴的數量計算待測基因的含量；另一種采用概率統計的數據處理方法，即通過泊松分布的方法對結果進行分析。應用概率統計分析數據和對數據處理方法的模型直接關系著結果的準確性和分析時間的長短。常用的統計方法是假設每個微反應單元的體積相同，根據泊松統計計算拷貝數，公式為：M=-Vx1n（1-x/）其中M是目標總拷貝數量；V是微反應單元數量；x是發光的微反應單元數量。

相比于cPCR技術和第二代qPCR技術，dPCR技術具有定量，可溯源至SI國際單位制摩爾；基質成分干擾較小[51]；靈敏度高；對抑制劑的敏感性較低；適合多重轉基因檢測[52.53]，可提高分析效率；實驗條件優化簡單[54]對實驗條件優化的要求較低，適合多重基因檢測等優勢，可為轉基因農作物提供準確的量值保證，目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴，但隨著系統加工工藝的改進以及使用較便宜的材料，聚合成更小的體積[556]，其價格將會不斷的降低，使其應用到更多的檢測中。分散方式與數量由數字PCR系統決定，分散體積和結果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優化得到。

PCR已成為分子診斷領域重要的技術手段之一，占據分子診斷市場的半壁江山。數字PCR是一代PCR技術，也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術。但數字PCR使用成本仍然相對較高，檢測靶點數少（一般≤6靶點/反應），阻礙了其在臨床中的大規模應用，提高數字PCR的多重檢測能力迫在眉睫。基于熒光通道數的增加和基于探針濃度梯度增加，均可以在一定程度上提高數字PCR檢測重數，然而只能達到"線性"增加的目的。基于探針濃度梯度的多重檢測技術雖然光'f明顯增加多重能力，但由于無法避免交叉反應現象，不能確保獲得位點特異性的分簇，因此穩定性不足、靈敏度較差，難以滿足臨床級別的數據要求。而基于創新的且數字PCR獨特適用的熒光編碼技術可以實現“指數”級的多重檢測，顛覆性的提高數字PCR檢測重數，覆蓋臨床應用多場景需求。目前dPCR中體積優化方法以光學顯微鏡觀測為主。德國進口數字PCR生命科學用品

通過“儀器+試劑”相互配合的方式，打出了數字PCR檢測的“組合拳”。美國數字PCR熒光通道

相比于qPCR，dPCR在轉基因檢測中具有以下優勢：（1）檢測靈敏度高：理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝，而實際應用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數下得到精確的結果；通常轉基因比參考基因（內源基因）濃度低很多；（2）前處理簡單且受基質成分干擾較小：dPCR反應效率和精密度受到食品基質成分干擾影響較小，可應用于混合基質樣品中低豐度DNA的檢測；（3）dPCR對抑制劑的敏感性較低：由于dPCR結果表示為“有熒光“或“無熒光”，即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光；（4）適合多重轉基因檢測：食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉基因片段，可以進行多重dPCR檢測，提高分析效率。同時，dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾，適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究，一次可識別不同的轉基因區域。下面詳細進行說明。美國數字PCR熒光通道

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