歐易酵母文庫助力小麥根研究,本研究克隆了小麥的 ERFs 轉錄因子家族 1 個成員 TaSRL1,它可以調控生長素生物合成、轉運和信號轉到相關基因的表達,并與生長素轉運基因 TaPIN2 啟動子序列結合促進其表達,進而抑制根的生長。此外,TaSRL1 可以與 JAZ 蛋白 TaTIFY9 相互作用,破壞 TaSRL1 對 TaPIN2 表達的促進作用。因此 TaSRL1 可整合根生長過程中生長素和 JA 信號,負調控根的伸長。TaSRL1-4A 標記對小麥育種過程中根系、株形和產量的改良具有重要研究意義。酵母單雜交技術是在酵母雙雜基礎上發展而來的一種研究核酸。上海酵母文庫質量
酵母雙雜交文庫:瘧疾是人類**古老的疾病之一,每年4月25日是世界防治瘧疾日,瘧疾目前仍是公眾健康所面臨的**嚴重威脅之一。基于青蒿素的聯合處理法(ACTs)是WHO推薦的比較好處理方案。因發現具有抗瘧作用的青蒿素,挽救了數百萬人的生命,屠呦呦教授獲得了2015年諾貝爾生理或醫學獎,從青蒿中分離出的青蒿素被推薦作為抗瘧疾的優先藥物。之前研究表明,茉莉酸(JA)介導促成的青蒿素積累依賴于光,轉錄因子HY5也通過參與光信號調控促進青蒿素合成。然而,光與JA相互作用機制及其對青蒿素生物合成調控的潛在機理仍未得到解決。湖南酵母文庫領域專業化的篩庫流程,多重質檢保證質量。初篩+復篩提高目標陽性克隆質粒精確度。
酵母單雜交篩選:(4)在篩選到的轉錄因子中,***GL1促進HIV-2轉錄。***GL1在免疫細胞中***表達,并與HIV的其他轉錄***因子,即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用,本研究中顯示HEK293T細胞中,***GL1過表達后,與LTR連接的螢火素酶表達上升近2倍,說明***GL1是一個轉錄***因子。值得一提的是,文章的背景介紹內容中,對應用其他技術(如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等)對HIV轉錄調控方向的已有成果分析,發現這些方法為HIV-1的復制和潛伏期提供了見解,但并沒有直接評估轉錄因子的結合和功能。文章中也對酵母單雜交技術與其他互作組技術(如Chip-seq、motif預測)進行了比較分析,發現eY1H技術對已識別因子的驗證率為30-60%,同等或優于其他技術。
酵母文庫實驗:本研究報道了 OsNF-YB9 和 OsNF-YB7 在水稻中呈現亞功能化。OsNF-YB7 主要在胚中表達,而 OsNF-YB9 主要在發育中的胚乳中表達。在擬南芥 lec1-1 中異源表達 OsNF-YB9 或 OsNF-YB7 可以彌補 lec1-1 缺陷。OsNF-YB9 功能缺失導致種子發育異常,種子變長、變窄、變薄,堊白率較高。此外,osnf-yb9 中淀粉合成相關基因的表達紊亂。OsNF-YB9 可以與主要在水稻胚乳中表達的蔗糖合酶蛋白激酶 SPK 相互作用。spk 敲除突變體種子與 osnf-yb9 突變體種子都表現出堊白增加的表型。OsNF-YB9 在水稻和擬南芥中的異位表達導致了種子變小。綜上表明,OsNF-YB9 在水稻種子發育中起到關鍵調控作用。酵母文庫已知蛋白互作靈活定制建庫。
利用酵母文庫進行雙雜交篩選,結果顯示 MdBT2 可以與 MdRGL3a 結合。MdRGL3a 編碼 GA 信號阻遏物 DELLA 蛋白,主要分布于細胞核中。MdRGL3a 對于 GA 處理非常敏感,可以引起其發生降解,PAC 處理可以提高其穩定性。進一步的酵母一對一雜交驗證實驗表明,兩者的結合依賴于 MdBT2 的 BTB 和 BACK 結構域、MdRGL3a 的 LHRI 和 SAW motif(圖 A-B)。并通過 GST pull-down、BiFC 實驗也證實了 MdBT2與 MdRGL3a 的結合(圖 C-D)。細胞外降解實驗顯示,與對照相比,MdRGL3a 與過表達 MdBT2 的愈傷組織的總蛋白共同孵育,會導致 MdRGL3a 的降解加快;而與抑制 MdBT2 表達的愈傷組織的總蛋白共同孵育,會導致 MdRGL3a 的降解減緩(圖 A)。并且蛋白酶體抑制劑 MG132 可以***抑制 MdRGL3a 的降解(圖 B)。改變 MdRGL3a 表達量并不影響 MdBT2 的降解。以上結果表明,MdRGL3a 可能通過 26S 蛋白酶體途徑發生降解,而 MdBT2 可以抑制 MdRGL3a 的降解。初篩+復篩提高目標陽性克隆質粒精確度。一對一篩庫驗證服務,客戶無需再次驗證。湖南酵母文庫領域
液態酵母單雙雜高通量篩庫方法及其應用。上海酵母文庫質量
酵母雙雜交實驗表明,PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用(圖 C),并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實(圖 D-E)。為進一步研究在年齡信號調控中的作用機制,分別構建了過表達PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比,過表達PtDAL1***提前了擬南芥的營養-生殖時相轉換(圖A),證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關鍵作用。過表達PtMADS11植株在短日照下表現出早開花和花序結構過早終止,表明PtMADS11在開花調節和花序內分生組織命運起到調控作用。在擬南芥中利用年齡調控通路不同節點關鍵基因突變體進行功能互補實驗,結果顯示過表達PtDAL1可以恢復由于過表達miR156導致的開花延遲,但ft缺失會導致PtDAL1失活,PtDAL1過表達也不能恢復soc1-1-2突變體的表型,表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達PtMADS11可以恢復由過表達miR156或ft缺失導致的開花延遲,表明PtMADS11對開花的調控不依賴于miR156或FT。上海酵母文庫質量
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