歐易生物酵母文庫技術發表的又一篇高水平研究論文。植物***茉莉酸(JA)參與植物許多發育過程的調控。JAZ蛋白是茉莉酸信號反應的阻遏物,通過抑制JA轉錄調節劑來負向調節JA信號。花青素和原花青素是種子、葉、花和果實中重要的植物次生代謝產物,可充當抗氧化劑,幫助***活性氧和對**老,對人類健康具有重要價值。已有研究表明,花青素和原花青素的生物合成基因的轉錄受MYB、basichelix-loop-helix(bHLH)及WD40蛋白的調控。其中,蘋果MYB轉錄因子MdMYB9參與調控JA介導的花青素和原花青素的生物合成,但其分子機制仍有待深入研究。酵母文庫雙雜交技術及應用。技術酵母文庫多少錢
根系是植物從土壤中吸收水分、養分和感知環境刺激的獨特***。根系結構的優化有助于提高植株的抗逆性和產量。ERF(ETHYLENERESPONSIVEFACTOR)是植物特有的轉錄因子家族之一,與植物的多種發育過程和抗逆性有關。ERFs在擬南芥和水稻根系發育中的作用已經多有報道,但小麥ERFs在根系發育中的作用尚待研究。報道了小麥 TaSRL1 轉錄因子調控根長的分子機制。文章中酵母雙雜交文庫由歐易生物完成。從小麥基因組中克隆了 TaSRL1 基因,RT-PCR 顯示 TaSRL1 主要在小麥苗期的根中表達。對 TaSRL1 啟動子序列進行預測分析。上海運用酵母文庫歐易生物21天極速建庫,一個文庫可以同時做單雜、雙雜、三雜,化藥小分子篩選。
酵母文庫實驗實驗表明,MdTRB1 可以正向調節花青素和原花青素的累積。MdTRB1 與 MdMYB9 結合可以增強后者對下游基因的轉錄***活性。而 MdTRB1 與 MdJAZ1 的結合,可以干擾其與 MdMYB9 的互作,進而負向調控 MdTRB1 介導的對花青素和原花青素積累的促進作用。本研究表明,JAZ1-TRB1-MYB9 復合物可以動態調控 JA 介導的花青素和原花青素的積累。本研究為進一步研究 JA 對花青素和原花青素生物合成的調節提供了新見解。本研究鑒定了一個可以與 MdMYB9 相互作用的蛋白 MdTRB1。實驗表明,MdTRB1 可以正向調節花青素和原花青素的累積。
酵母單雜交結果顯示,磷酸鹽饑餓響應因子OsPHR1/2/3可以***51個目標啟動子中的25個,包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以調控許多菌根共生相關基因的表達(圖A)。對叢枝菌根共生響應基因啟動子序列預測分析顯示,有78個轉錄因子被富集,87%的菌根共生響應基因受到OsPHR1/2/3的調控,其中42%受到OsPHR1/2/3的直接調控。因此推測OsPHR1/2/3可能是菌根共生調控網絡中的一個關鍵調控樞紐(圖A-B)。EMSA和熒光素酶報告實驗證實,OsPHR12可以直接結合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3啟動子序列(圖C-F),并且這種結合依賴于啟動子中的P1BS元件(圖G)。酵母文庫酵母雙雜交篩庫個性化定制研究方案。
通過酵母雙雜交進行篩選,結果顯示 SWC6 可以在藍光下與 CRY1 相互作用(圖 A-C)。同樣,酵母雙雜交實驗顯示 CRY2 也可以在藍光下與 SWC6 相互作用(圖 D)。并通過 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗(圖 E-L)證實 CRY1、CRY2 與 SWC6 的結合是藍光依賴性的。SWC6 是真核生物中已報道的 SWR1 復合物亞基,負責催化 H2A.Z 在染色質上的替換。已報道 SWR1 復合物中 SWC6 可以與 ARP6 亞基結合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗(圖 A-H)顯示,CRY1、CRY2 可以藍光依賴性與 ARP6 結合。10年酵母雙雜交建庫篩庫經驗結合SMART和GATEWAY建庫技術優勢。江蘇技術酵母文庫做什么
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酵母雙雜交實驗表明,PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用(圖 C),并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實(圖 D-E)。為進一步研究在年齡信號調控中的作用機制,分別構建了過表達PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比,過表達PtDAL1***提前了擬南芥的營養-生殖時相轉換(圖A),證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關鍵作用。過表達PtMADS11植株在短日照下表現出早開花和花序結構過早終止,表明PtMADS11在開花調節和花序內分生組織命運起到調控作用。在擬南芥中利用年齡調控通路不同節點關鍵基因突變體進行功能互補實驗,結果顯示過表達PtDAL1可以恢復由于過表達miR156導致的開花延遲,但ft缺失會導致PtDAL1失活,PtDAL1過表達也不能恢復soc1-1-2突變體的表型,表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達PtMADS11可以恢復由過表達miR156或ft缺失導致的開花延遲,表明PtMADS11對開花的調控不依賴于miR156或FT。技術酵母文庫多少錢
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