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北京酵母文庫(kù)使用

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-01

歐易酵母文庫(kù)助力蘋(píng)果花青素合成調(diào)控機(jī)制研究。近日,山東農(nóng)業(yè)大學(xué)郝玉金、由春香教授為共同通訊作者,在ThePlantJournal(IF:6.141)期刊發(fā)表了題為“JasmonateinducesanthocyaninandproanthocyanidinbiosynthesisinapplebymediatingtheJAZ1-TRB1-MYB9complex”的研究論文,報(bào)道了茉莉酸通過(guò)介導(dǎo)JAZ1-TRB1-MYB9復(fù)合物誘導(dǎo)蘋(píng)果中花青素和原花青素的生物合成。山東農(nóng)業(yè)大學(xué)安建平博士為***作者,文章中酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物協(xié)助完成。為在校期間為實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建3個(gè)高效的水稻酵母雙雜交文庫(kù)。北京酵母文庫(kù)使用

酵母雙雜交、pulldown和BiFC實(shí)驗(yàn)均顯示,MdTRB1可以通過(guò)其C末端與JAZ1蛋白互作。在蘋(píng)果葉片和愈傷組織中過(guò)表達(dá)MdJAZ1,花青素和原花青素的累積受到明顯抑制。在蘋(píng)果葉片和愈傷組織***表達(dá)MdJAZ1/MdJAZ1,結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)MdJAZ1抑制了MdTRB1對(duì)花青素和原花青素累積的促進(jìn)作用。Pull down 實(shí)驗(yàn)和熒光素酶互補(bǔ)成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在 MdJAZ1 存在下,MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合減弱(圖 a-c);外源施加 JA 可以部分恢復(fù) MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合。對(duì)于 MdTRB1 在 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素積累中的作用機(jī)制,本研究建立了一個(gè)新的模型:MdTRB1 通過(guò)與 MdMYB9 互作,增強(qiáng)了 MdMYB9 對(duì)下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性,進(jìn)而正向調(diào)節(jié)了 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素累積。在 JA 缺乏的條件下,MdJAZ1 與 MdTRB1 互作,干擾了 MdTRB1 與 MdMYB9 之間的結(jié)合;在 JA 存在的條件下,MdJAZ1 被降解,MdTRB1 被釋放出來(lái)以參與后續(xù)過(guò)程。北京酵母文庫(kù)使用酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)流程。

酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物協(xié)助完成。2021年3月,上海師范大學(xué)楊洪全教授為通訊作者,在ThePlantCell(IF:9.618)雜志發(fā)表了題為“ArabidopsisCryptochrome1ControlsPhotomorphogenesisthroughRegulationofH2A.ZDeposition”的研究論文,報(bào)道了擬南芥光形態(tài)建成調(diào)控的分子機(jī)制。上海師范大學(xué)茅志磊博士為***作者,文章中酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物協(xié)助完成。太陽(yáng)光不僅為植物的光合作用提供能量來(lái)源,也是調(diào)節(jié)許多植物發(fā)育過(guò)程的關(guān)鍵環(huán)境信號(hào)。植物可以通過(guò)多種光受體監(jiān)測(cè)和響應(yīng)不同波長(zhǎng)、方向和強(qiáng)度的光,其中**早發(fā)現(xiàn)的是藍(lán)光受體隱花素 CRYs。擬南芥中 CRYs 有 2 個(gè),其中 CRY1 主要參與調(diào)控光形態(tài)建成,CRY2 主要參與光周期開(kāi)花調(diào)控。

酵母單雜交結(jié)果顯示,磷酸鹽饑餓響應(yīng)因子OsPHR1/2/3可以***51個(gè)目標(biāo)啟動(dòng)子中的25個(gè),包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以調(diào)控許多菌根共生相關(guān)基因的表達(dá)(圖A)。對(duì)叢枝菌根共生響應(yīng)基因啟動(dòng)子序列預(yù)測(cè)分析顯示,有78個(gè)轉(zhuǎn)錄因子被富集,87%的菌根共生響應(yīng)基因受到OsPHR1/2/3的調(diào)控,其中42%受到OsPHR1/2/3的直接調(diào)控。因此推測(cè)OsPHR1/2/3可能是菌根共生調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控樞紐(圖A-B)。EMSA和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí),OsPHR12可以直接結(jié)合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3啟動(dòng)子序列(圖C-F),并且這種結(jié)合依賴于啟動(dòng)子中的P1BS元件(圖G)。文章中酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物完成。

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小歐從2018年即開(kāi)始關(guān)注酵母雜交與高通量測(cè)序相結(jié)合的技術(shù)發(fā)展,如2017年CaoGang老師等發(fā)表的RLL-Y2H技術(shù),實(shí)現(xiàn)了文庫(kù)篩文庫(kù)可能,該技術(shù)通過(guò)對(duì)酵母雙雜常用載體的改造,并結(jié)合高通量測(cè)序,可直接獲得AD-BD互作蛋白對(duì)。所用方法相當(dāng)巧妙,感興趣的同學(xué)請(qǐng)點(diǎn)擊《當(dāng)酵母雙雜交遇到高通量測(cè)序》。鈕老師團(tuán)隊(duì)之前的研究已經(jīng)鑒定了DAL1作為一種保守的針葉樹(shù)年齡生物標(biāo)記基因,在油松從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)到生殖生長(zhǎng)的時(shí)相轉(zhuǎn)變過(guò)程中起重要作用。為了進(jìn)一步理解年齡效應(yīng)如何驅(qū)動(dòng)針葉樹(shù)的發(fā)育,闡明與DAL1相關(guān)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)很關(guān)鍵。鈕老師團(tuán)隊(duì)利用傳統(tǒng)的Y2H篩選技術(shù)結(jié)合NGS測(cè)序技術(shù),優(yōu)化得到了Y2H-seq技術(shù),與傳統(tǒng)的篩選測(cè)序相比,大幅度節(jié)省了時(shí)間和實(shí)驗(yàn)成本。北京酵母文庫(kù)使用

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