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來源: 發(fā)布時間:2023-02-14

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酵母雙雜交實驗表明,PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用(圖 C),并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實(圖 D-E)。為進一步研究在年齡信號調控中的作用機制,分別構建了過表達PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比,過表達PtDAL1***提前了擬南芥的營養(yǎng)-生殖時相轉換(圖A),證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關鍵作用。過表達PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結構過早終止,表明PtMADS11在開花調節(jié)和花序內分生組織命運起到調控作用。在擬南芥中利用年齡調控通路不同節(jié)點關鍵基因突變體進行功能互補實驗,結果顯示過表達PtDAL1可以恢復由于過表達miR156導致的開花延遲,但ft缺失會導致PtDAL1失活,PtDAL1過表達也不能恢復soc1-1-2突變體的表型,表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達PtMADS11可以恢復由過表達miR156或ft缺失導致的開花延遲,表明PtMADS11對開花的調控不依賴于miR156或FT。安徽技術酵母文庫酵母生長速度快且容易操作的特點酵母文庫。

利用酵母雙雜交技術進行篩選,結果顯示SP8可以與水稻OsMYC3蛋白相互作用,并且二者互作關系通過酵母一對一互作、BiFC、Co-IP、LCI實驗得以驗證(圖A-C)。利用截短的SP8進行酵母一對一互作和Co-IP檢測表明,與OsMYC3的結合依賴于SP8的NTP結構域(圖D-E);同樣,OsMYC3的TAD結構域也是二者互作所必不可少的(圖F)。酵母雙雜交、BiFC實驗表明,OsMYC3可以與OsJAZ相互作用。經(jīng)茉莉酸處理,野生對照株根的長度明顯被抑制、一系列JA生物合成和信號傳導相關基因表達量上升,但Osmyc3突變體中抑制程度減輕、JA相關基因表達量上升減少。

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