有哪些技術手段可以進行空間轉錄組研究?已發表的關于空間轉錄組技術有Slide-seq , LCM-seq , seqFISH, MERFISH , Liver single cell zonation , Geo-seq and Tomo-seq。這些方法或是在細胞數量上限制較大,或是存在有效測序深度不足等問題。10x Genomics公司提供的Visium空間基因表達解決方案是目前較好的一個高通量空間轉錄組的商業化解決方案。該解決方案可以輕松地將空間轉錄組學技術應用到組織切片和染色的標準方法中,從而研究空間分辨率下整個轉錄組mRNA的表達情況,同時在同一組織切片中獲得組織學相關信息。只聽名字就想嘗試,不清楚空間轉錄組的原理及通過該技術究竟能拿到什么結果。河北歐易生物空間轉錄組有什么用
空間轉錄組數據分析的重要是根據每個芯片上每個spot的基因表達信息進行聚類,然后將spot根據坐標位置序列放回到組織的圖像上,同時可以對每個gene在組織上表達的空間位置進行定位。獲得測序數據后,首先利用Space Ranger 軟件可以自動化的對圖像進行處理、數據比對和Barcode處理。另外一個軟件Loupe Cell Browser是一個適用于Windows和MacOS的桌面應用程序,它可以快速、輕松地可視化和分析10X Visium數據。歐易生物具有上百例空間轉錄組項目執行經驗,致力通過質量的服務,助力各位科研工作者取得新的突破。湖南生物技術空間轉錄組空間轉錄組的組學板塊包括cDNA的合成、擴增、接頭連接和測序,記錄切片的轉錄本信息和空間位置信息 。
1. 10x Genomics空間轉錄組用于文庫構建的每張載玻片上有四個捕獲區域,每個捕獲區域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個被條形碼標記的點(barcoded spots),每個點的直徑為55 μm,點和點之間中心的距離為100 μm,并且每個點都有一個barcode序列。10X Visium空間轉錄組的實驗主要分為兩部分:組織學板塊和組學板塊。組織學板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態學信息;組學板塊包括cDNA的合成、擴增、接頭連接和測序,記錄切片的轉錄本信息和空間位置信息 。
1. 空間轉錄組實驗步驟A。切片制備和優化:取新鮮組織、冷凍、切片,并進行HE染色成像,優化確定切片是否覆蓋靶向區域。空間轉錄組實驗步驟B。切片固定和透化:將組織切片放置在含有與RNA結合捕獲探針的載玻片上,并進行固定和透化,使細胞中的 mRNA 得到釋放,并結合到相應的捕獲探針上,從而獲取基因表達信息。空間轉錄組實驗步驟c。逆轉和文庫構建:以捕獲的 RNA 為模板,進行 cDNA 合成,和測序文庫制備。空間轉錄組實驗步驟d。高通量上機測序:對制備好的測序文庫,進行二代高通量短讀長測序。空間轉錄組實驗步驟e。數據可視化分析:結合HE結果,確定哪些基因有表達,表達量高低,以及這些基因的空間位置信息。空間轉錄組是在組織原位檢測基因表達的一種技術。
許多當前時代空間轉錄組技術的基礎都是在自七十年代以來的幾十年間建立的。例如,于1976 年首先使用紫外線激光來切割組織。當前流行的技術,例如空間轉錄組學(ST)和 10X Visium 依靠這種微陣列技術,區別就在于是從放置在微陣列載玻片上的組織上而不是從溶液中來捕獲轉錄本信息。當前時代的空間轉錄組技術大致分為五類方向:激光顯微切割(LCM),單分子熒光原位雜交(smFISH),靶向原位測序(ISS),原位陣列捕獲和 其他非成像技術。從實驗到分析一站式掌握空間轉錄組流程及原理。浙江實力空間轉錄組
除了皮膚、胰腺和骨頭組織外,其余樣本類型均可開展10x Genomics空間轉錄組研究。河北歐易生物空間轉錄組有什么用
1. 空間轉錄組是一種用于從空間層面上解析RNA-seq數據的技術,從而解析單個組織切片中的所有mRNA。空間條形碼逆轉錄oligo(dT)引物在顯微鏡載玻片表面的有序附著,使得在mRNA樣品處理和后續測序過程中位置信息的編碼和獲取成為可能。單細胞RNA測序或組織樣本RNA測序,均無法為研究人員提供精確的空間信息。通過空間轉錄組技術可獲取組織中具體的位置的轉錄信息,為研究和診斷提供有效數據支撐。10x Genomics空間轉錄組技術可以應用于免疫、發育、神經和病理等研究方向。河北歐易生物空間轉錄組有什么用
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