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1. 10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域,每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個(gè)點(diǎn)的直徑為55 μm,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。10X Visium空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分:組織學(xué)板塊和組學(xué)板塊。組織學(xué)板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態(tài)學(xué)信息;組學(xué)板塊包括cDNA的合成、擴(kuò)增、接頭連接和測(cè)序,記錄切片的轉(zhuǎn)錄本信息和空間位置信息 。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果為未來人類心臟發(fā)育的研究提供重要的借鑒意義。10x空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)
空間轉(zhuǎn)錄組是在組織原位檢測(cè)基因表達(dá)的一種技術(shù),與bulk RNA-seq或單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序相比,空間轉(zhuǎn)錄組避免了組織中細(xì)胞位置信息的丟失,使得我們?cè)跈z測(cè)基因表達(dá)的同時(shí)獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息。已發(fā)表的關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)有Slide-seq , LCM-seq , seqFISH, MERFISH , Liver single cell zonation , Geo-seq and Tomo-seq。這些方法或是在細(xì)胞數(shù)量上限制較大,或是存在有效測(cè)序深度不足等問題。正是由于空間轉(zhuǎn)錄組可以從多維度解析生物學(xué)過程的特點(diǎn),近年來關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組無論是在技術(shù)開發(fā),還是大規(guī)模應(yīng)用或商業(yè)化,都得到蓬勃發(fā)展。
江西運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組只聽名字就想嘗試,不清楚空間轉(zhuǎn)錄組的原理及通過該技術(shù)究竟能拿到什么結(jié)果。
1. 空間轉(zhuǎn)錄組是一種用于從空間層面上解析RNA-seq數(shù)據(jù)的技術(shù),從而解析單個(gè)組織切片中的所有mRNA。空間條形碼逆轉(zhuǎn)錄oligo(dT)引物在顯微鏡載玻片表面的有序附著,使得在mRNA樣品處理和后續(xù)測(cè)序過程中位置信息的編碼和獲取成為可能。單細(xì)胞RNA測(cè)序或組織樣本RNA測(cè)序,均無法為研究人員提供精確的空間信息。通過空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可獲取組織中具體的位置的轉(zhuǎn)錄信息,為研究和診斷提供有效數(shù)據(jù)支撐。10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可以應(yīng)用于免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理等研究方向。
盡管前傳時(shí)代的空間技術(shù)被迅速棄用,但其思想和方法是當(dāng)今時(shí)代空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)。在過去的 5 年中,隨著眾多新技術(shù)的出現(xiàn)和 10x 公司 Visium 技術(shù)解決方案的商業(yè)化普及,該領(lǐng)域得到了快速的發(fā)展。一、實(shí)驗(yàn)技術(shù)有待改進(jìn)。我們可以做更多的事情來改善實(shí)驗(yàn)技術(shù)。例如 組織切片技術(shù)的發(fā)展、 smFISH 和 ISS 技術(shù)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)優(yōu)化、高效率的計(jì)算工具實(shí)現(xiàn)真正的 3D 空間轉(zhuǎn)錄組或者空間時(shí)序轉(zhuǎn)錄組等。二,數(shù)據(jù)庫的建立。盡管當(dāng)前空間轉(zhuǎn)錄組的數(shù)據(jù)在快速地增長(zhǎng),但尚未有對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)庫來對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總集成。正是由于空間轉(zhuǎn)錄組可以從多維度解析生物學(xué)過程的特點(diǎn)得到蓬勃發(fā)展。
空間轉(zhuǎn)錄組的方法和技術(shù)有哪些?廣義上講,現(xiàn)有的生成空間分辨轉(zhuǎn)錄組學(xué)的方法可分為四類:用于空間重建的計(jì)算策略和組學(xué)實(shí)驗(yàn)的組合,使用激光捕獲顯微切割(LCM)結(jié)合高通量進(jìn)行直接測(cè)量,使用熒光物質(zhì)的基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué) ,以及基于寡核苷酸的空間條形碼再加上高通量。每種方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。空間重構(gòu)的計(jì)算策略:這種計(jì)算方法可以充分利用內(nèi)在基因表達(dá)模式或共表達(dá)的趨勢(shì),從單個(gè)細(xì)胞的大量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中重構(gòu)細(xì)胞間的環(huán)境。然而,這些推論方法在某些情況下*呈現(xiàn)空間趨勢(shì)或特定組織的總體布局。基于LCM的方法:基于LCM的轉(zhuǎn)錄組學(xué)或基因組學(xué)成功地獲得了單個(gè)細(xì)胞的空間轉(zhuǎn)錄組,盡管其通量很低,但是在可以標(biāo)記成千上萬個(gè)單個(gè)細(xì)胞位置的多路復(fù)用條形碼策略可行之前,將少量細(xì)胞的數(shù)據(jù)粗略地整合到構(gòu)成***的巨大背景中,可能具有一定價(jià)值。基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué):基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué)在很大程度上增加了可檢測(cè)區(qū)域,但也存在一些問題,例如幾種smFISH方法很難從包括信號(hào)干擾、轉(zhuǎn)錄本積累等復(fù)雜背景中提取單個(gè)細(xì)胞。空間條形碼加高通量:費(fèi)用較高且無法在單個(gè)細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)錄組。Cell上發(fā)表了一篇利用空間轉(zhuǎn)錄組解析人鱗狀細(xì)胞*的文章。廣西歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組做什么
空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)和 10X Visium 依靠這種微陣列技術(shù),區(qū)別在于微陣列載玻片上的組織上的轉(zhuǎn)錄本信息。10x空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)
如果只是通過空間轉(zhuǎn)錄組或者單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組,研究人員在兩個(gè)樣本中均可以發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞相關(guān)基因或者淋巴細(xì)胞群,無法解釋兩個(gè)樣本預(yù)后之間的差異。但是通過空間轉(zhuǎn)錄組,就能很清晰看到兩個(gè)樣本之間的差異。作者借助空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)探究人類心臟在發(fā)育過程中的基因表達(dá)特征和細(xì)胞圖譜變化,發(fā)現(xiàn)對(duì)于每個(gè)發(fā)育階段的不同解剖區(qū)域,都有獨(dú)特的基因表達(dá)特征。結(jié)合單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),作者進(jìn)一步確定和豐富了胚胎心臟基因表達(dá)的空間注釋信息。 10x空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)
上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大。目前我公司在職員工以90后為主,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:科研服務(wù),科研檢測(cè),學(xué)術(shù)研究,技術(shù)咨詢等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營(yíng)宗旨,深受客戶好評(píng)。公司深耕科研服務(wù),科研檢測(cè),學(xué)術(shù)研究,技術(shù)咨詢,正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間、更寬泛的領(lǐng)域拓展。