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江西小鼠原代肝細胞分離培養

來源: 發布時間:2022-10-22

小鼠原代肝細胞的形態學觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎上改進,平均每只小鼠肝臟可獲得3×107~5×107個細胞。臺盼藍染色結果顯示,即時分離的原代肝細胞活率可達到85%~90%。即時分離的原代肝細胞胞體呈圓形或類圓形,多為單核或雙核,細胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細胞4h開始貼壁,24h大部分肝細胞貼壁,細胞形態多呈多角形或不規則形,細胞核大而圓,可見明顯的雙核或多核,細胞有向外延展趨勢,細胞間邊界不清(圖1B)。此外,按上述方法分離出的原代肝細胞在體外可存活1周左右,其中3~5d狀態比較好,第6天開始細胞凋亡增加 上海中喬新舟 原代肝細胞值得信賴。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!江西小鼠原代肝細胞分離培養

肝臟表面有一薄層致密的結締組織構成的被膜。被膜深入肝內形成網狀支架,將肝實質分隔為許多具有相似形態和相同功能的基本單位,稱為肝小葉。人類肝臟約有50萬個肝小葉。肝小葉呈多角棱柱體,約l毫米×2毫米大小,小葉的中軸貫穿一條靜脈,為靜脈。肝細胞以靜脈為中心呈放射狀排列,形成肝細胞索。肝細胞索相互吻合成網,網眼間有竇狀隙和血竇。肝細胞間的管狀間隙形成毛細膽管。因此可以說,肝小葉是由肝細胞、毛細膽管、血竇和相當于毛細淋巴管的竇周隙(狄氏間隙)所組成。江西小鼠原代肝細胞分離培養原代肝細胞的制作方法難嗎?上海中喬新舟告訴您。

隨著各型肝炎、肝硬化、肝等慢性肝病的發病率日益升高,體外培養的肝細胞也被普遍地用千肝病基礎研究中。盡管細胞培養技術不斷改進和成熟,國內外也先后建立了多株人肝細胞系,但體外分離和培養人正常肝細胞仍是非常有價值的研究材料。一材料與設備1.設備與器材超凈工作臺、離心機、CO2培養箱、-70℃冰箱、-20℃冰箱。2.無菌材料大培養皿、青霉素小瓶、50ml離心管、刻度吸管、彎頭吸管、T25培養瓶、手術剪、刀、鏤、細胞篩(100目)、消毒用乙醇棉球、流產胚胎、高糖DMEM培養液、胎牛血清、青/鏈霉素、D-Hanks溶液、0.25%胰蛋白酶/0.03%EDTA消化液。

    現在您知道了如何傳代細胞,讓我們再來看看傳代的一些不同應用。前面已經提到,人胚胎干細胞是一類必須傳代的細胞。它們通常與小鼠成纖維細胞MEF共培養,后者能提供幫助干細胞保持其多能性的因子。生長于飼養細胞上的干細胞到了合適的發育階段時需挑出來。可用微型移液管挑出或用玻璃工具輕輕將其刮下然后接種于新的培養液中進行擴增。有一些細胞系對酶消化敏感,或者貼壁很緊無法使用胰酶處理來重懸。細胞刮常用來輕輕將細胞從培養板的底部刮下來。如果細胞貼壁特別緊,可加入培養液或適當溶液后用血清吸管用力刮擦。使用該方法時要小心,細胞比較脆弱,容易在這種機械剝離的方法中受損。為了更快并可重復性的大量擴增細胞到超過單層培養瓶容量的規模,可以使用多層培養瓶,它的培養量可達單層培養瓶的3-5倍。 原代肝細胞的市場應用分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!

    在細胞實驗中,通過原代分離實驗得到的原代細胞,與永生化的細胞系相比,能夠忠實模擬體內生理狀態和功能,屬于“高階”的細胞模型,但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程,科學合理的原代細胞提取和培養方法對于任何實驗室都是一筆不可多得的財富。上次小編整理了脂肪原代細胞提取的教程,得到了大家的一致好評。應廣大讀者要求,小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細胞的提取“密鑰”,趕緊收好~肝臟是人體“”代謝,在包括葡萄糖、蛋白質和脂肪等多種物質代謝過程中發揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程,與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝臟中的細胞主要分為實質細胞和非實質細胞兩類:實質細胞的占比達到整個肝臟的70%-80%,包括肝細胞和少量的膽管內皮細胞;非實質細胞包括星狀細胞,巨噬細胞,NK細胞,成纖維細胞等。肝原代細胞提取培養的主要是肝細胞。 上海中喬新舟 原代肝細胞誠信經營。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!江西小鼠原代肝細胞分離培養

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    細胞傳代常用的儀器和試劑傳代細胞時,使用無菌技術和合適的試劑及設備尤為重要。針對您的細胞系選擇合適的培養液來得到比較好的生長和擴增很關鍵。每一個細胞系都有特定的生長營養組分配方,但是大多數細胞系起碼需要的添加物有以下這些:血清,如胎牛血清,需熱處理滅活其胎牛成分,它為細胞生長提供重要的生長因子。,如青霉素和鏈霉素用于防止細胞污染。其他的生長因子,如成纖維細胞生長因子,有助于延長細胞系的生長和擴增。不使用時,要將這些添加物或者“完全”細胞培養液保存于4攝氏度。首先要注意細胞培養液的顏色,富含營養的新鮮培養液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培養液中的營養成分時,開始在培養物中積累廢物和酸性物質,降低pH值。因此,許多細胞培養液含有酚紅,當培養物呈酸性時會將培養液顏色由橙色變為黃色。培養液需在變黃之前更換。當酚紅變為粉紅色時,說明培養基pH偏堿,不利于細胞健康生長。這時可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養液。 江西小鼠原代肝細胞分離培養

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