肝臟原位灌注法：（為分離肝細胞的經典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內達到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開腹腔，在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個結扎線環，將血管套管插入至肝掌，結扎，快速切開肝下血管與面壓力過高，關注500ml無鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovitzL15培養液，該懸液含大量肝細胞。5，用兩層紗布或60-80um尼龍篩過濾細胞懸液，靜置，使活細胞沉降20分，室溫下，去除含組織碎屑和死細胞的上清液。6，低速離心法清洗細胞50g40s三次以去除膠原酶，破壞的細胞以及肺肝實質來源的細胞。7，將細胞收集在培養液F12中（含，10ug/ml牛胰島素，），co2孵箱內培養。8，傳代培養：細胞長滿時，先用BSS洗1-2次，再用1：1的，吸除消化液，輕輕洗細胞層，加適量培養液，用吸管吹打成細胞懸液，接種培養。通常從一個大鼠肝中可獲得4*10‘6-6*10’6個活細胞。 原代肝細胞的規格介紹。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！上海大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟

    原代肝細胞體外培養48h后，參照文獻[20-21]報道的方法誘導脂肪變性細胞模型。設置不同濃度(0～)的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，FFA混合物與含10%胎牛血清的DMEM高糖培養基充分混勻后按濃度順序依次加入六孔板中，置于37℃、含5%CO2的細胞培養箱中培養，24h后油紅O染色，觀察細胞內脂滴沉積情況，并采用全自動生化分析儀檢測肝細胞內TG含量。油紅O染色步驟：棄去六孔板中的培養基，PBS緩沖液清洗1～2次，加入油紅O固定液固定20～30min；棄去固定液，加入新鮮配制的油紅O染液染色10～20min；60%的異丙醇浸洗1～2min，三蒸水清洗2～3次直至無多余染液；加入蘇木素染液染色1～2min，油紅OBuffer清洗1min，晾干，倒置顯微鏡下觀察。細胞內TG測定步驟：棄去六孔板中的培養基，PBS緩沖液清洗1次，按每孔細胞數量加入150～250μL的RIPA裂解液，刮刀刮取細胞，冰上裂解30min，4℃，13000r/min，離心10min，取上清，全自動生化分析儀檢測肝細胞內TG含量。 吉林大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟上海中喬新舟 原代肝細胞值得信賴。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！

    細胞復蘇：①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入（T25瓶）②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

    注意事項1.取材要求新鮮，無菌，解剖小鼠時，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污，去除無用組織，并要防止組織干燥。3.碾磨后及時用清水沖洗篩網，防止組織、細胞阻塞網孔。4.計數前，注意吸盡平皿里的細胞，充分混勻，使細胞分散成單個細胞。5.實驗操作應在操作臺無菌區域內進行，勿在邊緣非無菌區域操作。6.金屬器械不能在火焰中燒的時間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。7.另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞。8.吸取過營養液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養液能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養液中。 原代肝細胞的服務廠家排名。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！

原代培養就是提取的細胞體外次培養。，當原代培養成功以后，隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利于生長或發生中毒。此時就需要將培養物分割成小的部分，重新接種到另外的培養器皿（瓶）內，再進行培養。這個過程就稱為傳代，網上有很多解釋，一般的實驗用的到細胞的都是直接傳代培養，別的地方買過來細胞株細胞培養結束直接進行。原代肝細胞如何選擇？上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！上海大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟

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    在細胞實驗中，通過原代分離實驗得到的原代細胞，與永生化的細胞系相比，能夠忠實模擬體內生理狀態和功能，屬于“高階”的細胞模型，但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程，科學合理的原代細胞提取和培養方法對于任何實驗室都是一筆不可多得的財富。上次小編整理了脂肪原代細胞提取的教程，得到了大家的一致好評。應廣大讀者要求，小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細胞的提取“密鑰”，趕緊收好~肝臟是人體“”代謝，在包括葡萄糖、蛋白質和脂肪等多種物質代謝過程中發揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝臟中的細胞主要分為實質細胞和非實質細胞兩類：實質細胞的占比達到整個肝臟的70%-80%，包括肝細胞和少量的膽管內皮細胞；非實質細胞包括星狀細胞，巨噬細胞，NK細胞，成纖維細胞等。肝原代細胞提取培養的主要是肝細胞。 上海大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟

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