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來源: 發布時間:2022-09-08

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“做miRNA下調,QPCR檢測miRNA,表達水平無變化”,這到底是怎么回事?現有miRNA抑制手段,無論是基于載體構建的、還是化學合成的,本質上都是用跟成熟體互補的反義miRNA(miRNA海綿體屬于不完全互補的反義RNA重復),其可以通過結合miRNA,阻斷其與靶基因結合,但并不能有效引發miRNA的降解,原因有兩方面:其一是反義RNA與miRNA結合后,序列很短,導致Dicer酶(細胞內降解雙鏈RNA的主角)不能有效結合;其二是miRNA與Ago2以RISC復合物的形式存在,該復合物也會導致Dicer酶無法高效結合。因此,如果以反義RNA技術抑制miRNA功能,QPCR可以做,如果檢測出表達水平下降還好,即便未檢測到,也不表示抑制無效,正確的做法是直接檢測目的基因蛋白水平是否有上調。但若實驗者不清楚靶基因的情況下,不檢測到miRNA下調,心里是沒底的。成都瑞普信生物技術有限公司第三方檢測基礎實驗服務商。

磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實操過程中有哪些注意事項?細節決定成敗,在科研中更是如此。1.一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑,還要加入一定量的磷酸酶抑制劑,否則即使band壓出來也會很淺,結果也不可信。2.加一抗后比較好4度過夜,保證抗體有充分的結合時間。因為磷酸化的蛋白只占總的蛋白量的極少部分。二抗則室溫1小時即可。3.磷酸化抗體的好壞是一個關鍵因素,所以要選擇好的廠商。務必找專業的磷酸化抗體公司訂購。4.比較好根據廠商的protocol來操作實驗,這是實驗成功的保證。5.抗體的稀釋倍數也要適當。不同廠商也會有不同要求。成都瑞普信生物技術有限公司專業第三方檢測細胞轉染實驗!四川病理切片第三方檢測報告

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WB第三方檢測的整個過程是:制膠-上樣-電泳-轉膜-(清洗玻璃板)-封閉-抗體孵育,到的顯影。WB(Westernblot),即蛋白印跡或免疫印跡(immunoblotting),是一項在分子生物學、生物化學、免疫學等領域中應用非常的技術。這一技術利用抗體與組織或細胞樣品中特定蛋白的特異性結合作用,根據顯色條帶的位置和強弱實現蛋白鑒定和表達分析。WB技術具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性。選用合適的內參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過程中的誤差,通過灰度計量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達情況。重慶免疫熒光抗體第三方檢測公司推薦

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